| 摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第13-25页 |
| 1.1 猪流行性腹泻流行特点及危害 | 第13-14页 |
| 1.2 PEDV的病原学特征 | 第14-16页 |
| 1.2.1 PEDV分类地位 | 第14页 |
| 1.2.2 PEDV主要生物学特征 | 第14-15页 |
| 1.2.3 PEDV的基因组结构及其编码蛋白 | 第15-16页 |
| 1.3 PEDV S蛋白的研究 | 第16-20页 |
| 1.3.1 S蛋白的结构 | 第16-17页 |
| 1.3.2 S蛋白的膜融合功能 | 第17-18页 |
| 1.3.3 蛋白水解酶对S蛋白的激活 | 第18-20页 |
| 1.3.4 PEDV S1区的功能 | 第20页 |
| 1.4 冠状病毒受体识别机制 | 第20-21页 |
| 1.5 Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶的结构与功能 | 第21-24页 |
| 1.5.1 Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶家族的成员及结构 | 第21-23页 |
| 1.5.2 Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶对病毒的激活功能 | 第23页 |
| 1.5.3 Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶在组织中分布情况 | 第23-24页 |
| 1.6 研究的目的与意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-41页 |
| 2.1 试验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 病毒与细胞 | 第25页 |
| 2.1.2 组织与病料 | 第25页 |
| 2.1.3 质粒与菌株 | 第25页 |
| 2.1.4 主要试剂与耗材 | 第25-27页 |
| 2.2 试验方法 | 第27-41页 |
| 2.2.1 PEDV LJB/03 毒株对胰酶依赖性的测定 | 第27-29页 |
| 2.2.2 TTSPs真核表达质粒的构建 | 第29-31页 |
| 2.2.3 TTSPs重组质粒真核表达及鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.4 TTSPs对PEDV复制影响的测定 | 第32-35页 |
| 2.2.5 TTSPs与PEDV共定位分析 | 第35页 |
| 2.2.6 感染PEDV及健康仔猪小肠组织上内源性TTSPs的测定 | 第35-36页 |
| 2.2.7 TTSPs对PEDV S蛋白的作用 | 第36-41页 |
| 3 结果 | 第41-61页 |
| 3.1 PEDV LJB/03 P23、P146对胰酶依赖性的测定 | 第41-43页 |
| 3.1.1 LJB/03 P23、P146在添加/不添加胰酶的Vero细胞上培养情况 | 第41页 |
| 3.1.2 Real-time PCR检测LJB/03 P23、P146对胰酶的依赖性结果 | 第41-42页 |
| 3.1.3 PEDV LJB/03 亲本株及P23、P146的S蛋白氨基酸序列分析 | 第42-43页 |
| 3.2 TTSPS真核表达质粒的鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3 TTSPS重组质粒真核表达及鉴定 | 第44-46页 |
| 3.3.1 TTSPs重组质粒转染Vero细胞的间接免疫荧光鉴定 | 第44-45页 |
| 3.3.2 TTSPs重组质粒转染Vero细胞的western blot鉴定 | 第45-46页 |
| 3.4 TTSPS对PEDV复制影响的测定 | 第46-51页 |
| 3.4.1 内源性TTSPs在Vero上的RT-PCR检测结果 | 第46页 |
| 3.4.2 PEDV在表达外源TTSPs的Vero细胞上一步生长曲线 | 第46-47页 |
| 3.4.3 PEDV在表达外源TTSPs的Vero细胞上的滴度测定 | 第47-48页 |
| 3.4.4 PEDV在Vero细胞上繁殖对TTSPs剂量依赖性的测定 | 第48-49页 |
| 3.4.5 TTSPs对感染PEDV的Vero细胞膜融合作用的测定 | 第49-50页 |
| 3.4.6 TTSPs抑制剂对PEDV在表达外源TTSPs的Vero细胞上繁殖影响 | 第50页 |
| 3.4.7 PEDV组织毒在表达外源TTSPs的Vero细胞上分离培养测定 | 第50-51页 |
| 3.5 TTSPS与PEDV共定位分析 | 第51-52页 |
| 3.6 感染PEDV和健康仔猪小肠组织上内源性TTSPS的测定 | 第52-53页 |
| 3.7 TTSPS对PEDV S蛋白作用 | 第53-61页 |
| 3.7.1 PEDV LJB/03 亲本株和适应细胞株S蛋白真核表达质粒鉴定 | 第53-54页 |
| 3.7.2 LJB/03 亲本株和适应细胞株S蛋白表达的鉴定 | 第54-56页 |
| 3.7.3 胰酶及TTSPs对PEDV S蛋白裂解作用的测定 | 第56-57页 |
| 3.7.4 TTSPs与PEDV S蛋白的共定位分析 | 第57-58页 |
| 3.7.5 TTSPs对PEDV S蛋白包装的假病毒侵入细胞作用的测定 | 第58-59页 |
| 3.7.6 TTSPs对PEDV S蛋白作用细胞膜融合特性的测定 | 第59-61页 |
| 4 讨论 | 第61-67页 |
| 4.1 PEDV多次的体外传代具有不完全依赖胰酶的特性 | 第61-62页 |
| 4.2 TTSPs对PEDV在Vero细胞上繁殖具有促进作用 | 第62-64页 |
| 4.2.1 TTSPs促进PEDV在不添加胰酶的Vero细胞上的复制 | 第62-63页 |
| 4.2.2 TTSPs促进PEDV复制机理的初步探索 | 第63-64页 |
| 4.3 TTSPS对PEDV S蛋白具有激活作用 | 第64-67页 |
| 5 结论 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-80页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第80页 |
