| 摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-13页 |
| 1 引言 | 第14-24页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌概述 | 第14-17页 |
| 1.1.1 苏云金芽胞杆菌的生理特征 | 第14-15页 |
| 1.1.2 杀虫基因的命名 | 第15页 |
| 1.1.3 苏云金芽胞杆菌cry基因的表达调控 | 第15-17页 |
| 1.2 σ~(54)因子概述 | 第17-18页 |
| 1.2.1 σ~(54)因子的结构特点和作用机制 | 第17-18页 |
| 1.2.2 σ~(54)因子的功能及其调控的代谢途径 | 第18页 |
| 1.3 细菌增强子结合蛋白概述 | 第18-21页 |
| 1.3.1 增强子结合蛋白的结构与功能 | 第18-20页 |
| 1.3.2 细菌增强子结合蛋白的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.4 细菌中 3-羟基丁酮代谢途径 | 第21-23页 |
| 1.4.1 3-羟基丁酮的理化性质 | 第21页 |
| 1.4.2 3-羟基丁酮的生理意义 | 第21-22页 |
| 1.4.3 细菌中 3-羟基丁酮分解代谢途径 | 第22-23页 |
| 1.5 立题依据和目的意义 | 第23-24页 |
| 1.5.1 立题依据 | 第23页 |
| 1.5.2 目的意义 | 第23-24页 |
| 2. 材料方法 | 第24-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-31页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第24-27页 |
| 2.1.2 培养基 | 第27页 |
| 2.1.3 抗生素 | 第27-28页 |
| 2.1.4 酶及生化试剂 | 第28页 |
| 2.1.5 溶液与缓冲液 | 第28-29页 |
| 2.1.6 引物序列 | 第29-31页 |
| 2.2 仪器设备 | 第31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-41页 |
| 2.3.1 模板制备 | 第31-32页 |
| 2.3.2 Bt基因组粗提取 | 第32页 |
| 2.3.3 PCR扩增体系 | 第32-33页 |
| 2.3.4 重叠PCR | 第33页 |
| 2.3.5 酶切反应 | 第33页 |
| 2.3.6 DNA片段纯化 | 第33页 |
| 2.3.7 DNA片段连接反应 | 第33-34页 |
| 2.3.8 大肠杆菌热激感受态细胞的制备及转化 | 第34页 |
| 2.3.9 苏云金芽胞杆菌电击感受态细胞的制备与转化 | 第34-35页 |
| 2.3.10 序列测定及分析 | 第35页 |
| 2.3.11 突变体生长曲线测定 | 第35页 |
| 2.3.12 菌体运动能力测定 | 第35页 |
| 2.3.13 芽胞形成率测定 | 第35页 |
| 2.3.14 光学显微镜观察 | 第35-36页 |
| 2.3.15 大肠杆菌蛋白表达 | 第36页 |
| 2.3.16 大肠杆菌蛋白纯化 | 第36页 |
| 2.3.17 蛋白定量及SDS-PAGE电泳 | 第36-37页 |
| 2.3.18 β-半乳糖苷酶活性测定 | 第37页 |
| 2.3.19 TRIzol法提取Bt总RNA | 第37-38页 |
| 2.3.20 RNA的纯化 | 第38页 |
| 2.3.21 c DNA合成 | 第38-39页 |
| 2.3.22 RT-PCR | 第39-40页 |
| 2.3.23 三羟基丁酮含量测定 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-59页 |
| 3.1 细菌增强子结合蛋白的表达与纯化 | 第41-48页 |
| 3.1.1 细菌增强子结合蛋白表达载体的构建 | 第41-45页 |
| 3.1.2 细菌增强子结合蛋白的表达与纯化 | 第45-48页 |
| 3.2 受EBP调控的启动子鉴定 | 第48-56页 |
| 3.2.1 P1024启动子转录活性分析 | 第49-50页 |
| 3.2.2 P2025启动子转录活性分析 | 第50-51页 |
| 3.2.3 P4161启动子转录活性分析 | 第51-53页 |
| 3.2.4 P4943启动子转录活性分析 | 第53-54页 |
| 3.2.5 P5327启动子转录活性分析 | 第54-56页 |
| 3.3 3-羟基丁酮代谢途径转录调控研究 | 第56-59页 |
| 3.3.1 aco基因簇的序列分析和RT-PCR分析 | 第56-57页 |
| 3.3.2 aco基因簇转录调控分析 | 第57-58页 |
| 3.3.3 aco R突变体的表型分析 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-63页 |
| 4.1 b EBP蛋白的表达 | 第59页 |
| 4.2 σ~(54)调控的 3-羟基丁酮代谢 | 第59-60页 |
| 4.3 aco R基因的缺失对Bt的影响 | 第60-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第74页 |
