| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 前言 | 第12-18页 |
| 1 材料与方法 | 第18-30页 |
| 1.1 材料 | 第18-22页 |
| 1.1.1 供试菌株 | 第18页 |
| 1.1.2 载体与试剂 | 第18页 |
| 1.1.3 试验仪器 | 第18-19页 |
| 1.1.4 培养基配方 | 第19页 |
| 1.1.5 主要溶液配置 | 第19-22页 |
| 1.2 方法 | 第22-30页 |
| 1.2.1 菌丝体诱导培养 | 第22页 |
| 1.2.2 菌核栽培 | 第22页 |
| 1.2.3 引物设计与合成 | 第22页 |
| 1.2.4 总RNA提取和cDNA合成 | 第22-24页 |
| 1.2.5 目的基因全长克隆 | 第24-25页 |
| 1.2.6 基因全长与克隆载体连接 | 第25页 |
| 1.2.7 连接产物的转化 | 第25页 |
| 1.2.8 重组质粒pMD-18T-eg和pMD-18T-bgl的提取 | 第25页 |
| 1.2.9 重组质粒pMD-18T-eg和pMD-18T-bgl的PCR检测及双酶切 | 第25-26页 |
| 1.2.10 基因全长与表达载体连接 | 第26-27页 |
| 1.2.11 连接产物转化 | 第27页 |
| 1.2.12 重组质粒pET-30a-eg和pET-30a-bgl的提取 | 第27页 |
| 1.2.13 重组质粒pET-3 0a-eg和pET-30a-bgl的鉴定 | 第27页 |
| 1.2.14 目的蛋白体外诱导表达 | 第27页 |
| 1.2.15 SDS-PAGE电泳检测 | 第27-28页 |
| 1.2.16 重组表达蛋白的纯化 | 第28页 |
| 1.2.17 蛋白的变复性及定量分析 | 第28页 |
| 1.2.18 重组蛋白Western Blotting分析 | 第28-30页 |
| 2.结果与分析 | 第30-46页 |
| 2.1 桦褐孔菌JL01菌丝体和菌核总RNA检测 | 第30页 |
| 2.2 PCR扩增基因电泳图 | 第30-31页 |
| 2.3 克隆载体重组质粒PCR检测结果 | 第31-32页 |
| 2.4 基因全长序列测序结果与对比分析 | 第32-36页 |
| 2.4.1 目的基因序列对比 | 第32-35页 |
| 2.4.2 目的蛋白的理化特性及信号肽 | 第35-36页 |
| 2.5 克隆载体重组质粒与表达载体双酶切 | 第36-37页 |
| 2.6 原核表达载体鉴定及序列通读分析 | 第37-41页 |
| 2.7 SDS-PAGE电泳分析结果 | 第41-42页 |
| 2.8 蛋白纯化结果及浓度测定 | 第42-44页 |
| 2.9 Western Blotting检测分析 | 第44-46页 |
| 3 讨论 | 第46-49页 |
| 4 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
