| 缩略词表 | 第7-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 前言 | 第13-35页 |
| 1. 背景介绍 | 第13-14页 |
| 2. 先天性脊柱侧凸的病因学研究 | 第14-23页 |
| CS的分子生物学机制 | 第14-15页 |
| NOTCH信号通路 | 第15-16页 |
| WNT信号通略 | 第16-19页 |
| FGF信号通路 | 第19页 |
| NOTCH、WNT和FGFS条信号通路相互作用 | 第19-21页 |
| 环境致病因素 | 第21页 |
| 遗传致病因素 | 第21-23页 |
| 3. CNV——先天缺陷的重要遗传学病因 | 第23-27页 |
| 全基因组水平CNV检测——aCGH芯片 | 第25-27页 |
| 4. 16p11.2微缺失可能为CS的重要遗传学病因 | 第27-32页 |
| CS患者存在新发、罕见、高致病性16p11.2微缺失 | 第27-28页 |
| 16p11.2区域TBX6基因的单倍剂量不足可能为其机制 | 第28-32页 |
| 5. CRISPR/Cas9基因编辑技术 | 第32-35页 |
| 第一部分 16p11.2缺失/TBX6基因变异对先天性脊柱侧凸的致病性研究 | 第35-56页 |
| 1.1 材料与方法 | 第35-44页 |
| 1.1.1 实验设备 | 第35页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第35-36页 |
| 1.1.3 样本采集 | 第36-39页 |
| 1.1.4 外周血全基因组DNA提取 | 第39页 |
| 1.1.5 qPCR筛查16p11.2缺失 | 第39-41页 |
| 1.1.6 靶向CGH芯片验证16p11.2缺失 | 第41-42页 |
| 1.1.7 对TBX6基因全长进行PCR扩增 | 第42-44页 |
| 1.1.8 千人基因组数据库筛查 | 第44页 |
| 1.1.9 统计分析 | 第44页 |
| 1.2 结果与分析 | 第44-52页 |
| 1.2.1 DNA质量检测 | 第44-45页 |
| 1.2.2 定量PCR对16p11.2缺失的初筛 | 第45-46页 |
| 1.2.3 CGH芯片验证16p11.2区域缺失在CS中高发 | 第46-47页 |
| 1.2.4 对照样本中没有发现16p11.2区域缺失 | 第47-48页 |
| 1.2.5 在237例CS散发病例中发现6例移码及无义突变 | 第48-49页 |
| 1.2.6 在237例CS散发病例中发现10例错义突变 | 第49-50页 |
| 1.2.7 在166个对照样本中没有发现无义突变 | 第50页 |
| 1.2.8 千人基因组数据库中没有发现16p11.2区域缺失或移码突变 | 第50-52页 |
| 1.2.9 统计分析16p11.2区域缺失/TBX6基因变异在CS病人中高发 | 第52页 |
| 1.3 讨论 | 第52-55页 |
| 1.3.1 16p11.2区域缺失是CS的重要病因 | 第52-53页 |
| 1.3.2 TBX6无效变异(null mutation)是CS的重要原因 | 第53页 |
| 1.3.3 TBX6基因亚效等位基因在CS发病中起重要作用 | 第53-55页 |
| 1.4 结论 | 第55-56页 |
| 第二部分 TBX6基因相关性先天性脊柱侧凸的临床表型研究 | 第56-72页 |
| 2.1 材料与方法 | 第56-57页 |
| 2.1.1 椎体畸形 | 第56页 |
| 2.1.2 肋骨畸形 | 第56页 |
| 2.1.3 其他合并畸形 | 第56页 |
| 2.1.4 统计方法 | 第56-57页 |
| 2.2 结果与分析 | 第57-66页 |
| 2.2.1 基本信息 | 第57-61页 |
| 2.2.2 椎体畸形种类 | 第61页 |
| 2.2.3 椎体畸形分布 | 第61-63页 |
| 2.2.4 椎体畸形数量 | 第63-64页 |
| 2.2.5 肋骨畸形发生率 | 第64页 |
| 2.2.6 肋骨畸形类型 | 第64-66页 |
| 2.2.7 椎管内畸形发生率 | 第66页 |
| 2.3 讨论 | 第66-71页 |
| 2.3.1 性别及年龄构成 | 第66-67页 |
| 2.3.2 椎体畸形种类及分布 | 第67-69页 |
| 2.3.3 肋骨畸形发生率及类型 | 第69-70页 |
| 2.3.4 椎管内畸形发生率 | 第70-71页 |
| 2.4 结论 | 第71-72页 |
| 第三部分 TBX6基因相关性先天性脊柱侧凸的动物模型验证 | 第72-97页 |
| 3.1 材料与方法 | 第72-80页 |
| 3.1.1 实验设备 | 第72页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第72-73页 |
| 3.1.3 斑马鱼饲养及观察 | 第73页 |
| 3.1.4 Cas9靶点选择 | 第73-75页 |
| 3.1.5 制备gRNA | 第75-76页 |
| 3.1.6 制备F0斑马鱼与靶点突变效率检测 | 第76-77页 |
| 3.1.7 斑马鱼基因组DNA简易方法 | 第77页 |
| 3.1.8 检测F0的germline transmission制备 | 第77页 |
| 3.1.9 筛选携带靶位点突变的F1成鱼 | 第77-78页 |
| 3.1.10 F1成鱼杂交得到纯和突变F2 | 第78页 |
| 3.1.11 幼鱼软骨-骨骼无酸双染色 | 第78-79页 |
| 3.1.12 成鱼茜素红-阿辛蓝联合染色 | 第79-80页 |
| 3.2 结果与分析 | 第80-94页 |
| 3.2.1 Cas9靶点选择 | 第80-82页 |
| 3.2.2 制备F0斑马鱼与靶点突变效率检测 | 第82-84页 |
| 3.2.3 突变斑马鱼筛选 | 第84-88页 |
| 3.2.4 幼鱼软骨-骨骼无酸双染色及表型分析 | 第88-93页 |
| 3.2.5 成鱼茜素红-阿辛蓝联合染色及表型分析 | 第93-94页 |
| 3.3 讨论 | 第94-96页 |
| 3.3.1 斑马鱼作为TBX6剂量不足动物模型 | 第94-95页 |
| 3.3.2 动物模型证实TBX6剂量不足致病模型 | 第95-96页 |
| 3.3.3 动物模型具有TBX6相关性CS相似表型 | 第96页 |
| 3.4 结论 | 第96-97页 |
| 展望 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-109页 |
| 综述 | 第109-119页 |
| References | 第115-119页 |
| 致谢 | 第119-121页 |
