| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 引言 | 第10-23页 |
| 1.1 琥珀酸的理化性质 | 第10页 |
| 1.2 琥珀酸的应用价值 | 第10-11页 |
| 1.3 琥珀酸的传统合成方法 | 第11页 |
| 1.4 琥珀酸生物转化法 | 第11-13页 |
| 1.5 琥珀酸发酵菌种 | 第13-17页 |
| 1.5.1 产琥珀酸放线菌 | 第13-14页 |
| 1.5.2 产琥珀酸螺菌 | 第14-15页 |
| 1.5.3 大肠杆菌 | 第15-17页 |
| 1.6 琥珀酸的发酵工艺研究 | 第17-18页 |
| 1.6.1 分批补料发酵 | 第17页 |
| 1.6.2 控制溶氧发酵 | 第17-18页 |
| 1.6.3 固定化发酵 | 第18页 |
| 1.7 琥珀酸的分离提取 | 第18-21页 |
| 1.7.1 钙盐法 | 第19页 |
| 1.7.2 铵盐法 | 第19-20页 |
| 1.7.3 萃取法 | 第20页 |
| 1.7.4 离子交换法 | 第20页 |
| 1.7.5 超滤和电渗析 | 第20-21页 |
| 1.8 本论文的研究意义及研究内容 | 第21-23页 |
| 1.8.1 本论文的研究意义 | 第21-22页 |
| 1.8.2 本文的研究内容 | 第22-23页 |
| 第2章 重组大肠杆菌WS102的构建 | 第23-35页 |
| 2.1 引言 | 第23-24页 |
| 2.2 材料与方法 | 第24-27页 |
| 2.2.1 试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第25页 |
| 2.2.3 菌种、质粒及引物 | 第25-26页 |
| 2.2.4 培养基 | 第26-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-31页 |
| 2.3.1 mgsA基因的敲除 | 第27-30页 |
| 2.3.1.1 WS100感受态的制备 | 第27页 |
| 3.3.1.2 pKD46质粒转化 | 第27页 |
| 2.3.1.3 同源片段的制备 | 第27-28页 |
| 2.3.1.4 目的基因的敲除 | 第28-29页 |
| 2.3.1.5 目的片段敲除的PCR鉴定 | 第29页 |
| 2.3.1.6 卡那霉素抗性基因消除 | 第29-30页 |
| 2.3.2 无氧管培养 | 第30页 |
| 2.3.3 WS100与WS102发酵对比 | 第30页 |
| 2.3.4 检测方法 | 第30-31页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第31-34页 |
| 2.4.1 mgsA基因的敲除 | 第31-32页 |
| 2.4.2 WS102的发酵验证 | 第32-34页 |
| 2.4.2.1 WS100在NBS培养基中发酵 | 第32-33页 |
| 2.4.2.2 WS102在NBS培养基中发酵 | 第33-34页 |
| 2.5 小结 | 第34-35页 |
| 第3章 大肠工程菌WS102利用二氧化碳发酵产琥珀酸 | 第35-49页 |
| 3.1 引言 | 第35-36页 |
| 3.2 实验材料 | 第36-38页 |
| 3.2.1 菌种 | 第36页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第36-37页 |
| 3.2.3 实验试剂 | 第37页 |
| 3.2.4 培养基 | 第37-38页 |
| 3.3 实验方法 | 第38-39页 |
| 3.3.1 种子的活化 | 第38页 |
| 3.3.2 全阶段通二氧化碳气体发酵琥珀酸 | 第38页 |
| 3.3.3 利用二氧化碳气体发酵的前期设计 | 第38-39页 |
| 3.3.3.1 培养基中的碳酸氢盐对琥珀酸发酵的影响 | 第38页 |
| 3.3.3.2 中和剂中添加碳酸盐产琥珀酸的影响 | 第38-39页 |
| 3.3.3.3 改良后利用二氧化碳气体分批发酵 | 第39页 |
| 3.3.4 利用二氧化碳的分批补料发酵 | 第39页 |
| 3.3.5 发酵指标检测 | 第39页 |
| 3.4 实验结果 | 第39-47页 |
| 3.4.1 全阶段利用二氧化碳气体发酵琥珀酸 | 第39-41页 |
| 3.4.2 前期发酵设计 | 第41-46页 |
| 3.4.2.1 前期培养基中添加碳酸氢盐发酵 | 第41-43页 |
| 3.4.2.2 发酵过程以碳酸盐为中和剂 | 第43-45页 |
| 3.4.2.3 前期不通入二氧化碳气体分批发酵琥珀酸 | 第45-46页 |
| 3.4.3 利用二氧化碳进行分批补料发酵 | 第46-47页 |
| 3.5 小结 | 第47-49页 |
| 第4章 发酵液中琥珀酸的分离提取研究 | 第49-58页 |
| 4.1 引言 | 第49页 |
| 4.2 实验材料 | 第49-50页 |
| 4.2.1 实验样品 | 第49页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第49-50页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第50页 |
| 4.3 实验方法 | 第50-55页 |
| 4.3.1 琥珀酸含量的测定 | 第50页 |
| 4.3.2 蛋白含量的测定 | 第50-51页 |
| 4.3.3 脱色率的测定 | 第51-52页 |
| 4.3.4 琥珀酸的提取方法 | 第52-55页 |
| 4.3.4.1 工艺路线 | 第52页 |
| 4.3.4.2 发酵液预处理 | 第52-53页 |
| 4.3.4.3 陶瓷膜过滤 | 第53页 |
| 4.3.4.4 氯化钙钙化 | 第53页 |
| 4.3.4.5 酸解 | 第53页 |
| 4.3.4.6 活性炭脱色 | 第53-54页 |
| 4.3.4.7 离子交换 | 第54页 |
| 4.3.4.8 浓缩结晶 | 第54-55页 |
| 4.4 实验结果 | 第55-57页 |
| 4.4.1 钙化条件的优化 | 第55-57页 |
| 4.4.1.1 氯化钙浓度 | 第55页 |
| 4.4.1.2 钙化反应温度 | 第55-56页 |
| 4.4.1.3 钙化反应时间 | 第56-57页 |
| 4.4.2 钙盐法提取琥珀酸的结果 | 第57页 |
| 4.5 小结 | 第57-58页 |
| 第5章 结论与展望 | 第58-60页 |
| 5.1 结论 | 第58-59页 |
| 5.2 展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
