| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 第1章绪论 | 第12-28页 |
| ·葡萄糖氧化酶的研究现状 | 第12-20页 |
| ·葡萄糖氧化酶的研究 | 第12-13页 |
| ·葡萄糖氧化酶的作用机制 | 第13-14页 |
| ·葡萄糖氧化酶的性质 | 第14-16页 |
| ·葡萄糖氧化酶活应用 | 第16-18页 |
| ·葡萄糖电极的应用 | 第16-17页 |
| ·葡萄糖氧化酶可用于食品和饮料添加剂 | 第17页 |
| ·葡萄糖氧化酶在葡萄酒酒生产过程中的应用 | 第17-18页 |
| ·葡萄糖酸的生产 | 第18页 |
| ·GOD 在纺织工业的作用 | 第18页 |
| ·葡萄糖氧化酶的分子生物学研究 | 第18-19页 |
| ·葡萄糖氧化酶分离纯化的研究 | 第19-20页 |
| ·葡萄糖氧化酶的基因工程研究 | 第20页 |
| ·毕赤酵母表达系统的研究 | 第20-26页 |
| ·毕赤酵母的特征 | 第21页 |
| ·赤酵母表达系统的特点 | 第21页 |
| ·赤酵母表达系统的组成 | 第21-25页 |
| ·宿主菌株 | 第21-23页 |
| ·表达载体 | 第23-25页 |
| ·毕赤酵母表达外源蛋白的研究 | 第25-26页 |
| ·本课题的构想及其意义 | 第26-28页 |
| 第2章黑曲霉葡萄糖氧化酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达 | 第28-54页 |
| ·材料 | 第28-34页 |
| ·质粒和菌株 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28-29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·培养基和缓冲液液 | 第29-34页 |
| ·培养基 | 第29-31页 |
| ·试剂配制 | 第31-34页 |
| ·方法 | 第34-43页 |
| ·黑曲霉葡萄糖氧化酶基因的克隆 | 第34-40页 |
| ·CTAB 法提取黑曲霉核DNA | 第34-35页 |
| ·黑曲霉核DNA 质量检测及浓度测定 | 第35页 |
| ·通过PCR 法扩增黑曲霉ZM-8葡糖糖氧化酶基因 | 第35-36页 |
| ·扩增产物的胶回收 | 第36页 |
| ·葡糖糖氧化酶基因与克隆载体的连接 | 第36-38页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及连接产物的转化 | 第38页 |
| ·重组质粒pUC19-His-GOD的鉴定 | 第38-39页 |
| ·测序以及序列分析 | 第39-40页 |
| ·带有组氨酸标签序列的葡萄糖氧化酶基因酵母表达载体的构建 | 第40-43页 |
| ·pPIC9k质粒的制备 | 第40页 |
| ·pPIC9k表达载体的线性化 | 第40页 |
| ·线性化pPIC9k载体去磷酸化处理 | 第40页 |
| ·GOD 与表达载体pPIC9k的连接 | 第40-41页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第41页 |
| ·提取质粒 | 第41页 |
| ·重组质粒pPIC9K-His-GOD的鉴定 | 第41页 |
| ·重组质粒pPIC9K-His-GOD的线性化 | 第41-42页 |
| ·线性化的酵母表达载体电转化巴斯德毕赤酵母G5115 | 第42页 |
| ·转化产物的筛选与鉴定 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-52页 |
| ·黑曲霉核DNA的提取鉴定 | 第43页 |
| ·GOD基因的扩增结果 | 第43-44页 |
| ·GOD基因的克隆及鉴定 | 第44-46页 |
| ·GOD基因测序及序列分析 | 第46-49页 |
| ·pPIC9K-His-GOD重组质粒构建及鉴定 | 第49-51页 |
| ·葡萄糖氧化酶基因在毕赤酵母G5115中的表达 | 第51-52页 |
| ·重组质粒转化G5115 | 第51-52页 |
| ·转化菌落的筛选与鉴定 | 第52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 附录A：攻读学位期间所发表的学术论文及成果 | 第61页 |
