| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-19页 |
| 1.1 乳酸菌的应用及其面临的环境胁迫 | 第12页 |
| 1.2 胆盐与胆盐胁迫 | 第12-14页 |
| 1.2.1 胆盐 | 第12-13页 |
| 1.2.2 胆盐胁迫 | 第13-14页 |
| 1.3 胆盐水解酶 | 第14-17页 |
| 1.3.1 胆盐水解酶概述 | 第14页 |
| 1.3.2 胆盐水解酶的来源 | 第14-15页 |
| 1.3.3 胆盐水解酶的性质 | 第15页 |
| 1.3.4 胆盐水解酶的结构 | 第15-16页 |
| 1.3.5 胆盐水解酶在微生物胆盐抗性中的功能 | 第16-17页 |
| 1.3.6 胆盐水解酶的应用 | 第17页 |
| 1.4 本论文主要研究内容 | 第17-19页 |
| 1.4.1 立题依据和研究意义 | 第17-18页 |
| 1.4.2 本论文的主要研究内容 | 第18-19页 |
| 第二章 胆盐水解酶对乳酸乳球菌胆盐耐受能力的影响 | 第19-32页 |
| 2.1 前言 | 第19页 |
| 2.2 材料与方法 | 第19-23页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第19页 |
| 2.2.2 试剂和仪器 | 第19-20页 |
| 2.2.3 培养条件 | 第20页 |
| 2.2.4 分子生物学操作 | 第20-22页 |
| 2.2.5 BSH的诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第22页 |
| 2.2.6 BSH活性的测定 | 第22页 |
| 2.2.7 胆盐胁迫 | 第22-23页 |
| 2.2.8 透射电镜样品的制备 | 第23页 |
| 2.2.9 胁迫菌株胞内胆盐组分的测定 | 第23页 |
| 2.2.10 蛋白浓度的测定 | 第23页 |
| 2.3 结果 | 第23-29页 |
| 2.3.1 表达载体的构建和验证 | 第23-24页 |
| 2.3.2 重组菌中BSH的诱导表达 | 第24页 |
| 2.3.3 BSH表达对L. lactis胆盐耐受能力的影响 | 第24-26页 |
| 2.3.4 胆盐胁迫条件下的细胞形态 | 第26页 |
| 2.3.5 BSH表达菌株胞内类囊泡组分的鉴定 | 第26-28页 |
| 2.3.6 BSH表达菌株胞内胆酸含量分析 | 第28-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-31页 |
| 2.5 本章小结 | 第31-32页 |
| 第三章 胆盐水解酶催化特性的定量表征 | 第32-44页 |
| 3.1 前言 | 第32页 |
| 3.2 材料与方法 | 第32-36页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第32-33页 |
| 3.2.2 试剂和仪器 | 第33页 |
| 3.2.3 培养条件 | 第33页 |
| 3.2.4 分子生物学操作 | 第33-35页 |
| 3.2.5 BSH在E. coli中的诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第35页 |
| 3.2.6 重组菌株的表现型分析 | 第35页 |
| 3.2.7 酶蛋白的纯化 | 第35页 |
| 3.2.8 酶学性质的分析方法 | 第35-36页 |
| 3.3 结果 | 第36-42页 |
| 3.3.1 表达载体的构建和验证 | 第36-37页 |
| 3.3.2 BSH的过量表达及纯化 | 第37-38页 |
| 3.3.3 BSH的最适反应条件 | 第38-39页 |
| 3.3.4 BSH的酶反应动力学分析 | 第39-41页 |
| 3.3.5 二硫苏糖醇对酶反应动力学的影响 | 第41-42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-43页 |
| 3.5 本章小结 | 第43-44页 |
| 第四章 胆盐水解酶的构效关系解析 | 第44-56页 |
| 4.1 前言 | 第44页 |
| 4.2 材料与方法 | 第44-47页 |
| 4.2.1 菌株和质粒 | 第44页 |
| 4.2.2 试剂和仪器 | 第44-45页 |
| 4.2.3 培养条件 | 第45页 |
| 4.2.4 分子生物学操作 | 第45页 |
| 4.2.5 酶蛋白的纯化 | 第45页 |
| 4.2.6 酶学性质的分析方法 | 第45-46页 |
| 4.2.7 酶反应过程的热力学测定 | 第46页 |
| 4.2.8 光谱分析 | 第46-47页 |
| 4.2.9 BSH的结构信息分析 | 第47页 |
| 4.3 结果 | 第47-54页 |
| 4.3.1 BSH催化过程的热力学特征 | 第47-49页 |
| 4.3.2 胆酸基团与BSH1结合方式的预测 | 第49-50页 |
| 4.3.3 胆酸基团与BSH1作用的圆二色谱 | 第50-51页 |
| 4.3.4 胆酸基团与BSH1作用的紫外-可见吸收光谱 | 第51页 |
| 4.3.5 BSH突变体的构建 | 第51-53页 |
| 4.3.6 BSH突变体的酶学性质 | 第53-54页 |
| 4.4 讨论 | 第54-55页 |
| 4.5 本章小结 | 第55-56页 |
| 第五章 胆盐水解酶的分子改造强化细胞胆盐耐受性 | 第56-69页 |
| 5.1 前言 | 第56页 |
| 5.2 材料与方法 | 第56-61页 |
| 5.2.1 菌株和质粒 | 第56页 |
| 5.2.2 试剂和仪器 | 第56-57页 |
| 5.2.3 培养条件 | 第57页 |
| 5.2.4 质粒DNA的提取及感受态细胞的制备与转化 | 第57页 |
| 5.2.5 BSH突变体库的构建与高通量筛选 | 第57-59页 |
| 5.2.6 BSH突变体的异源过量表达 | 第59-60页 |
| 5.2.7 重组菌胆盐耐受能力分析 | 第60页 |
| 5.2.8 酶学特性分析 | 第60页 |
| 5.2.9 荧光光谱分析 | 第60-61页 |
| 5.2.10 差示扫描量热分析 | 第61页 |
| 5.3 结果 | 第61-66页 |
| 5.3.1 BSH的结构优化及高通量筛选 | 第61-62页 |
| 5.3.2 重组菌的胆盐耐受性分析 | 第62页 |
| 5.3.3 胆盐胁迫下重组菌胞内胆酸含量分析 | 第62-63页 |
| 5.3.4 BSH突变体的异源过量表达 | 第63-64页 |
| 5.3.5 BSH突变体的酶学性质表征 | 第64-66页 |
| 5.3.6 荧光光谱分析 | 第66页 |
| 5.4 讨论 | 第66-68页 |
| 5.5 本章小结 | 第68-69页 |
| 第六章 胆盐水解酶对细胞关键生理指标的影响 | 第69-87页 |
| 6.1 前言 | 第69页 |
| 6.2 材料与方法 | 第69-74页 |
| 6.2.1 菌株 | 第69页 |
| 6.2.2 试剂和仪器 | 第69-70页 |
| 6.2.3 培养条件 | 第70页 |
| 6.2.4 胆盐胁迫实验 | 第70页 |
| 6.2.5 细胞表面特性的测定 | 第70-71页 |
| 6.2.6 细胞膜的特征分析 | 第71页 |
| 6.2.7 细胞膜蛋白组学差异分析 | 第71-73页 |
| 6.2.8 qRT-PCR验证 | 第73页 |
| 6.2.9 细胞代谢相关生理指标的测定 | 第73-74页 |
| 6.3 结果 | 第74-83页 |
| 6.3.1 胆盐胁迫下BSH对L. lactis菌体表面特性的影响 | 第74-75页 |
| 6.3.2 胆盐胁迫下BSH对L. lactis细胞膜生理特性的影响 | 第75-77页 |
| 6.3.3 基于双向电泳的膜蛋白组学分析 | 第77-81页 |
| 6.3.4 胆盐胁迫下BSH对L. lactis胞内微环境的影响 | 第81-82页 |
| 6.3.5 胆盐胁迫下BSH对L. lactis细胞中心代谢途径的影响 | 第82-83页 |
| 6.4 讨论 | 第83-85页 |
| 6.5 本章小结 | 第85-87页 |
| 主要结论与展望 | 第87-89页 |
| 论文创新点 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-101页 |
| 附录: 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第101页 |
