| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-14页 |
| 1.1 N-乙酰神经氨酸的结构与理化特性 | 第7页 |
| 1.1.1 N-乙酰神经氨酸的结构 | 第7页 |
| 1.1.2 唾液酸的理化特性 | 第7页 |
| 1.2 N-乙酰神经氨酸的生理功能及应用 | 第7-9页 |
| 1.2.1 N-乙酰神经氨酸与神经系统 | 第8页 |
| 1.2.2 N-乙酰神经氨酸的抗菌排毒 | 第8页 |
| 1.2.3 N-乙酰神经氨酸的应用 | 第8-9页 |
| 1.3 微生物的N-乙酰神经氨酸代谢途径 | 第9-10页 |
| 1.4 N-乙酰神经氨酸的生产 | 第10-12页 |
| 1.4.1 从天然产物中提取 | 第10页 |
| 1.4.2 化学合成 | 第10页 |
| 1.4.3 多聚物降解 | 第10页 |
| 1.4.4 酶法合成 | 第10-11页 |
| 1.4.5 全细胞生物催化 | 第11页 |
| 1.4.6 微生物发酵法 | 第11-12页 |
| 1.5 唾液酸的检测 | 第12页 |
| 1.6 立题意义与研究内容 | 第12-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-24页 |
| 2.1 材料 | 第14-17页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第14-15页 |
| 2.1.2 引物 | 第15-16页 |
| 2.1.3 试剂和培养基 | 第16-17页 |
| 2.1.4 仪器和设备 | 第17页 |
| 2.2 方法 | 第17-24页 |
| 2.2.1 分子生物学实验技术 | 第17-18页 |
| 2.2.2 基因敲除突变盒的构建 | 第18-19页 |
| 2.2.3 AGE基因的酶学性质研究 | 第19页 |
| 2.2.4 大肠杆菌基因的敲除 | 第19-21页 |
| 2.2.5 基于Red重组系统的基因敲除方法 | 第21页 |
| 2.2.6 抗性筛选标记基因的删除 | 第21-22页 |
| 2.2.7 实时荧光定量PCR | 第22页 |
| 2.2.8 大肠杆菌的N-乙酰神经氨酸发酵 | 第22-23页 |
| 2.2.9 生化检测方法 | 第23-24页 |
| 第三章 结果与分析 | 第24-43页 |
| 3.1 大肠杆菌产NeuAc突变株的构建 | 第24-35页 |
| 3.1.1 大肠杆菌产NeuAc的代谢途径分析 | 第24-25页 |
| 3.1.2 大肠杆菌产NeuAc代谢途径的构建 | 第25-26页 |
| 3.1.3 6-磷酸葡萄糖胺-N-乙酰转移酶基因GNA1的整合 | 第26-28页 |
| 3.1.4 N-乙酰-D-葡萄糖胺2差向异构酶（AGE）的克隆与表达 | 第28-29页 |
| 3.1.5 外源基因slr的整合 | 第29-32页 |
| 3.1.6 荧光定量PCR检测基因转录水平 | 第32-33页 |
| 3.1.7 重组大肠杆菌发酵生产NeuAc的初步检测 | 第33-35页 |
| 3.2 大肠杆菌产NeuAc副产物途径的分析 | 第35-39页 |
| 3.2.1 大肠杆菌产NeuAc副产物途径的基因敲除 | 第35-36页 |
| 3.2.2 重组大肠杆菌的摇瓶发酵 | 第36-38页 |
| 3.2.3 丙酮酸含量对NeuAc产量的影响 | 第38页 |
| 3.2.4 过量表达glmS基因的重组菌构建 | 第38-39页 |
| 3.3 重组菌发酵合成N-乙酰神经氨酸 | 第39-43页 |
| 3.3.1 shnal基因突变盒的构建 | 第39-41页 |
| 3.3.2 shnal基因替换重组菌的nanA基因 | 第41页 |
| 3.3.3 重组菌株K12TEJBAIAapls的发酵罐实验 | 第41-43页 |
| 主要结论与展望 | 第43-45页 |
| 主要结论 | 第43-44页 |
| 展望 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第49页 |
