| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-20页 |
| 1.1 环糊精的结构与性质 | 第10-12页 |
| 1.1.1 环糊精的基本结构 | 第10页 |
| 1.1.2 环糊精的物理性质 | 第10-11页 |
| 1.1.3 环糊精的生化性质 | 第11页 |
| 1.1.4 HP-β-CD的特性 | 第11-12页 |
| 1.2 甾体药物研究进展 | 第12-13页 |
| 1.2.1 甾体化合物 | 第12页 |
| 1.2.2 甾体药物 | 第12-13页 |
| 1.2.3 甾体药物的制备方法 | 第13页 |
| 1.3 微生物转化甾体药物的研究进展 | 第13-17页 |
| 1.3.1 雄烯二酮及关键酶 3-甾酮-△1-脱氢酶的简介 | 第13-14页 |
| 1.3.2 边链选择性降解甾体化合物 | 第14-16页 |
| 1.3.3 微生物降解甾体母核 | 第16-17页 |
| 1.4 蛋白质组学 | 第17-18页 |
| 1.4.1 蛋白质组学简介 | 第17-18页 |
| 1.4.2 蛋白质组学的主要研究技术及技术路线 | 第18页 |
| 1.4.3 蛋白质组学在微生物学研究中的应用 | 第18页 |
| 1.5 立题意义 | 第18-19页 |
| 1.6 本课题主要的研究内容 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3 菌株与质粒 | 第21页 |
| 2.1.4 培养基和培养条件 | 第21页 |
| 2.1.5 PCR引物设计 | 第21-23页 |
| 2.1.6 本实验主要溶液的配制方法及酶活反应体系 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-30页 |
| 2.2.1 在含有HP-β-CD体系中M. neoaurum JC-12生物转化植物甾醇合成ADD的研究 | 第23页 |
| 2.2.2 HP-β-CD存在与否条件下M. neoaurum JC-12降解植物甾醇的 2-DE分析 | 第23-25页 |
| 2.2.3 目的蛋白质的质谱分析 | 第25-26页 |
| 2.2.4 反转录实时荧光定量PCR | 第26-27页 |
| 2.2.5 KSDD的克隆、表达及纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.6 KSDD酶学性质的研究 | 第28-29页 |
| 2.2.7 重组钝齿棒杆菌全细胞转化AD产物的TLC及HPLC分析 | 第29-30页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第30-45页 |
| 3.1 羟丙基-β-环糊精对M. neoaurum JC-12合成ADD产量的影响 | 第30页 |
| 3.2 M. neoaurum JC-12在添加HP-β-CD与否条件下的蛋白质组学分析 | 第30-34页 |
| 3.2.1 在添加HP-β-CD与否条件下，新金色分枝杆菌JC-12全细胞蛋白的 2-DE初步分析 | 第30-31页 |
| 3.2.2 新金色分枝杆菌JC-12蛋白质组的 2-DE图谱差异比对分析 | 第31页 |
| 3.2.3 显著表达差异蛋白质的质谱鉴定 | 第31-32页 |
| 3.2.4 ADD合成途径中关键蛋白质的功能分析 | 第32-33页 |
| 3.2.5 新金色分枝杆菌差异表达蛋白质的功能分析 | 第33-34页 |
| 3.3 新金色分枝杆菌中编码关键蛋白质基因的RT-qPCR检测 | 第34-37页 |
| 3.3.1 菌体总RNA的提取及其纯度分析 | 第34页 |
| 3.3.2 HP-β-CD存在与否条件下编码差异表达蛋白质基因的转录水平分析 | 第34-36页 |
| 3.3.3 编码ADD合成途径中关键蛋白质基因在HP-β-CD存在与否条件下的转录水平分析 | 第36-37页 |
| 3.4 编码关键蛋白质基因（ksdd）的异源表达 | 第37-40页 |
| 3.4.1 ksdd基因的克隆 | 第37-38页 |
| 3.4.2 重组表达载体pXMJ19-ksdd的构建 | 第38页 |
| 3.4.3 重组钝齿棒杆菌的构建及筛选 | 第38-39页 |
| 3.4.4 重组钝齿棒杆菌的酶活测定 | 第39页 |
| 3.4.5 重组菌C.crenatum SYPA 5-5/pXMJ19-ksdd的SDS-PAGE分析 | 第39-40页 |
| 3.4.6 重组蛋白酶KSDD的纯化 | 第40页 |
| 3.5 重组KSDD酶学性质的研究 | 第40-43页 |
| 3.5.1 重组KSDD的最适反应温度及热稳定性研究 | 第40-41页 |
| 3.5.2 重组KSDD的最适反应pH及pH稳定性研究 | 第41-42页 |
| 3.5.3 金属离子及EDTA对重组KSDD的影响 | 第42页 |
| 3.5.4 KSDD纯酶的酶动力学参数 | 第42-43页 |
| 3.6 重组钝齿棒杆菌全细胞转化AD产物的TLC及HPLC分析 | 第43-45页 |
| 主要结论与展望 | 第45-47页 |
| 主要结论 | 第45页 |
| 展望 | 第45-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第52页 |
