| 符号说明 | 第5-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1. 前言 | 第14-29页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒的基本特征 | 第14-17页 |
| 1.1.1 病原的分类和形态 | 第14页 |
| 1.1.2 病毒的理化特性 | 第14页 |
| 1.1.3 病毒的基因组结构 | 第14-15页 |
| 1.1.4 主要结构蛋白 | 第15-16页 |
| 1.1.5 次要结构蛋白 | 第16-17页 |
| 1.2 DNA疫苗的研究进展 | 第17-22页 |
| 1.2.1 核酸疫苗的组成结构 | 第17页 |
| 1.2.2 DNA疫苗的免疫机制 | 第17-19页 |
| 1.2.3 核酸疫苗的优点及其不足 | 第19-21页 |
| 1.2.3.1 核酸疫苗的优点 | 第19-21页 |
| 1.2.3.2 核酸疫苗的不足 | 第21页 |
| 1.2.4 影响DNA免疫效果的主要因素 | 第21页 |
| 1.2.5 PRRSV基因疫苗的研究 | 第21-22页 |
| 1.2.6 pXJ41真核表达载体 | 第22页 |
| 1.3 DNA疫苗佐剂的研究现状 | 第22-26页 |
| 1.3.1 环二鸟苷酸（c-di-GMP） | 第22-24页 |
| 1.3.1.1 c-di-GMP在微生物体内的合成 | 第22-23页 |
| 1.3.1.2 c-di-GMP在微生物体内的降解 | 第23页 |
| 1.3.1.3 c-di-GMP在微生物体内发挥第二信使功能的作用机制 | 第23-24页 |
| 1.3.2 环二腺苷酸（c-di-AMP） | 第24-25页 |
| 1.3.2.1 c-di-AMP的合成 | 第24页 |
| 1.3.2.2 c-di-AMP的分解代谢 | 第24页 |
| 1.3.2.3 c-di-AMP参与的细胞进程 | 第24-25页 |
| 1.3.3 环鸟嘌呤-腺嘌呤核苷酸（2’-3’ cGAMP） | 第25-26页 |
| 1.3.3.1 哺乳动物中 2’-3’ cGAMP的生成 | 第25-26页 |
| 1.3.3.2 哺乳动物 2’-3’ cGAMP的生物学作用 | 第26页 |
| 1.4 第二信使佐剂的研究进展 | 第26-28页 |
| 1.4.1 c-di-GMP的研究进展 | 第26-27页 |
| 1.4.2 c-di-AMP的研究进展 | 第27页 |
| 1.4.3 2’-3’ cGAMP的研究进展 | 第27-28页 |
| 1.5 实验目的及意义 | 第28-29页 |
| 2. 材料与方法 | 第29-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-32页 |
| 2.1.1 细胞、菌株和质粒 | 第29页 |
| 2.1.2 试剂 | 第29页 |
| 2.1.3 仪器 | 第29-30页 |
| 2.1.4 溶液及配制 | 第30-32页 |
| 2.2 试验方法 | 第32-41页 |
| 2.2.1 PRRSV GP5蛋白基因疫苗的构建及鉴定 | 第32-38页 |
| 2.2.1.1 GP5引物设计 | 第32页 |
| 2.2.1.2 病毒RNA的提取 | 第32页 |
| 2.2.1.3 反转录 | 第32-33页 |
| 2.2.1.4 GP5基因的扩增 | 第33页 |
| 2.2.1.5 目的条带的回收 | 第33-34页 |
| 2.2.1.6 质粒和DNA双酶切 | 第34页 |
| 2.2.1.7 载体与目的片段的连接 | 第34-35页 |
| 2.2.1.8 重组载体的转化 | 第35页 |
| 2.2.1.9 PRRSV GP5真核表达载体的提取 | 第35-36页 |
| 2.2.1.10 PRRSV GP5真核表达载体的验证 | 第36页 |
| 2.2.1.11 PRRSV GP5真核表达载体的鉴定 | 第36-38页 |
| 2.2.1.11.1 细胞的传代及培养 | 第36页 |
| 2.2.1.11.2 间接免疫荧光实验 | 第36-37页 |
| 2.2.1.11.3 Western Blot | 第37-38页 |
| 2.2.2 合成三种分子佐剂必需的蛋白质的提取及纯化 | 第38-39页 |
| 2.2.2.1 合成c-di-GMP所必需的酶蛋白（VCA0956蛋白）的提取及纯化 | 第38-39页 |
| 2.2.2.2 合成c-di-AMP所必需的酶蛋白（VC0179蛋白）的提取及纯化 | 第39页 |
| 2.2.2.3 合成 2’-3’cGAMP所必需的酶蛋白（mcGAS蛋白）的提取及纯化 | 第39页 |
| 2.2.3 分子佐剂的制备及检测 | 第39-41页 |
| 2.2.3.1 分子佐剂c-di-GMP的制备及检测 | 第39-40页 |
| 2.2.3.2 分子佐剂c-di-AMP的制备及检测 | 第40页 |
| 2.2.3.3 分子佐剂 2’-3’cGAMP的制备及检测 | 第40-41页 |
| 3. 实验结果 | 第41-49页 |
| 3.1 PRRSV GP5蛋白基因疫苗的构建及鉴定结果 | 第41-43页 |
| 3.1.1 PCR扩增结果 | 第41页 |
| 3.1.2 空载体和目的片段酶切结果 | 第41-42页 |
| 3.1.3 重组真核表达载体的酶切鉴定 | 第42页 |
| 3.1.4 序列比对 | 第42-43页 |
| 3.1.5 PRRSV GP5真核表达载体的鉴定 | 第43页 |
| 3.1.5.1 间接免疫荧光 | 第43页 |
| 3.1.5.2 Western Blot | 第43页 |
| 3.2 分子佐剂c-di-GMP的制备及检测结果 | 第43-45页 |
| 3.2.1 合成c-di-GMP所必需的酶蛋白（VCA 0956蛋白）的提取及纯化结果 | 第43-45页 |
| 3.2.2 分子佐剂 c-di-GMP 的制备及检测结果 | 第45页 |
| 3.3 分子佐剂c-di-AMP的制备及检测结果 | 第45-47页 |
| 3.3.1 合成c-di-AMP所必需的酶蛋白（VC0179蛋白）的提取及纯化结果 | 第45-46页 |
| 3.3.2 分子佐剂c-di-AMP的制备及检测结果 | 第46-47页 |
| 3.4 分子佐剂 2’-3’cGAMP的制备及检测结果 | 第47-49页 |
| 3.4.1 合成 2’-3’cGAMP所必需的酶蛋白（mcGAS蛋白）的提取及纯化结果 | 第47-48页 |
| 3.4.2 分子佐剂 2’-3’cGAMP的制备及检测结果 | 第48-49页 |
| 4. 讨论 | 第49-51页 |
| 4.1 PRRSV GP5蛋白基因疫苗构建及鉴定 | 第49页 |
| 4.2 分子佐剂c-di-GMP、c-di-AMP、2’-3’ cGAMP的制备及检测 | 第49-51页 |
| 5. 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
