| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 主要缩略词 | 第8-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1 猪轮状病毒研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1 猪轮状病毒简介 | 第12页 |
| 1.2 PoRV的病原学特征 | 第12-13页 |
| 1.3 PoRV的流行病学 | 第13页 |
| 1.4 PoRV分子生物学 | 第13-14页 |
| 1.5 PoRV疫苗研究进展 | 第14-15页 |
| 2 猪流行性腹泻病毒研究进展 | 第15-17页 |
| 2.1 猪流行性腹泻病毒简介 | 第15页 |
| 2.2 PEDV的流行病学 | 第15-16页 |
| 2.3 PEDV的分子生物学 | 第16-17页 |
| 2.4 PEDV疫苗研究进展 | 第17页 |
| 3 脾转移因子研究进展 | 第17-19页 |
| 3.1 理化性质 | 第18页 |
| 3.2 生物学特性 | 第18页 |
| 3.3 作用机制 | 第18页 |
| 3.4 在猪病防治方面的应用 | 第18-19页 |
| 4 细胞因子佐剂研究进展 | 第19-20页 |
| 4.1 IFN-α相关研究进展 | 第19页 |
| 4.2 IL-12相关研究进展 | 第19-20页 |
| 5 目的意义 | 第20-21页 |
| 第二章 PoRV VP7与PEDV S基因的克隆与生物信息学分析 | 第21-40页 |
| 1 实验材料 | 第21-22页 |
| 1.1 毒株、菌株与细胞 | 第21页 |
| 1.2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 1.3 主要仪器 | 第22页 |
| 2 方法 | 第22-28页 |
| 2.1 PoRV VP7与PEDV S基因的克隆 | 第22-27页 |
| 2.2 目的基因的序列测定与分析 | 第27页 |
| 2.3 PoRV VP7与PEDV S基因生物信息学分析 | 第27-28页 |
| 3 结果 | 第28-38页 |
| 3.1 RT-PCR结果 | 第28页 |
| 3.2 重组质粒酶切鉴定结果 | 第28-29页 |
| 3.3 重组质粒的PCR鉴定结果 | 第29-30页 |
| 3.4 目的基因测序结果 | 第30页 |
| 3.5 目的基因序列分析 | 第30-31页 |
| 3.6 生物信息学分析 | 第31-38页 |
| 4 讨论 | 第38页 |
| 5 小结 | 第38-40页 |
| 第三章 pPI-2.EGFP.VP7.S真核表达载体的构建与体外表达检测 | 第40-52页 |
| 1 材料 | 第40页 |
| 1.1 菌株、质粒和细胞 | 第40页 |
| 1.2 主要试剂 | 第40页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第40页 |
| 2 方法 | 第40-45页 |
| 2.1 pPI-2.EGFP.VP7真核表达载体的构建 | 第40-42页 |
| 2.2 pPI-2.EGFP.VP7.S真核表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 2.3 真核表达质粒pPI-2.EGFP.VP7.S的体外表达检测 | 第43-45页 |
| 3 实验结果 | 第45-50页 |
| 3.1 pPI-2.EGFP.VP7真核表达载体的构建 | 第45-47页 |
| 3.2 pPI-2.EGFP.VP7.S真核表达载体的构建 | 第47-48页 |
| 3.3 真核表达质粒pPI-2.EGFP.VP7.S的体外表达检测 | 第48-50页 |
| 4 讨论 | 第50-51页 |
| 4.1 柔性基因Linker的设计 | 第50-51页 |
| 4.2 重组蛋白的表达 | 第51页 |
| 5 小结 | 第51-52页 |
| 第四章 联合表达PoRV VP7/PEDV S基因DNA疫苗免疫效果研究 | 第52-76页 |
| 1 材料 | 第52-53页 |
| 1.1 质粒、毒株 | 第52页 |
| 1.2 实验动物 | 第52页 |
| 1.3 主要试剂 | 第52-53页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第53页 |
| 2 方法 | 第53-57页 |
| 2.1 质粒DNA的大量抽提 | 第53页 |
| 2.2 小鼠的分组与免疫 | 第53页 |
| 2.3 样品采集 | 第53-54页 |
| 2.4 针对VP7-S融合基因PCR方法的灵敏性研究 | 第54页 |
| 2.5 pPI-2.EGFP.VP7.S质粒在小鼠体内的动态分布检测 | 第54页 |
| 2.6 pPI-2.EGFP.VP7.S质粒在小鼠体内的安全性研究 | 第54-55页 |
| 2.7 小鼠血清中PoRV特异性抗体IgG的检测 | 第55页 |
| 2.8 小鼠血清中PEDV特异性抗体IgG的检测 | 第55-56页 |
| 2.9 细胞因子检测 | 第56-57页 |
| 2.10 脾细胞增殖实验 | 第57页 |
| 2.11 数据处理 | 第57页 |
| 3 实验结果 | 第57-71页 |
| 3.1 针对VP7-S融合基因PCR方法的灵敏性研究 | 第57-58页 |
| 3.2 pPI-2.EGFP.VP7.S质粒在小鼠体内的动态分布检测 | 第58-60页 |
| 3.3 pPI-2.EGFP.VP7.S质粒在小鼠体内的安全性研究 | 第60-61页 |
| 3.4 小鼠血清中PoRV特异性抗体IgG的检测 | 第61-64页 |
| 3.5 小鼠血清中PEDV特异性抗体IgG的检测 | 第64-67页 |
| 3.6 细胞因子检测 | 第67-70页 |
| 3.7 小鼠脾淋巴细胞增殖实验 | 第70-71页 |
| 4 讨论 | 第71-75页 |
| 4.1 不同免疫途径对免疫效果影响 | 第72页 |
| 4.2 不同免疫剂量对免疫效果影响 | 第72-73页 |
| 4.3 不同佐剂对免疫效果影响 | 第73-74页 |
| 4.4 脾淋巴细胞增殖实验 | 第74-75页 |
| 5 小结 | 第75-76页 |
| 全文结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 攻读学位期间发表学术论文 | 第85页 |
