| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 第1章 绪论 | 第14-24页 |
| ·甘露聚糖、甘露低聚糖与β-甘露聚糖酶概述 | 第14-15页 |
| ·甘露聚糖简述 | 第14页 |
| ·甘露低聚糖简述 | 第14页 |
| ·甘露聚糖酶简述 | 第14-15页 |
| ·毕赤酵母表达系统概述 | 第15-18页 |
| ·毕赤酵母表达系统特点 | 第15-16页 |
| ·毕赤酵母表达系统宿主菌 | 第16页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第16-17页 |
| ·基因工程巴斯德毕赤酵母的发酵过程 | 第17-18页 |
| ·透明颤菌血红蛋白概述 | 第18-20页 |
| ·透明颤菌简述 | 第18页 |
| ·透明颤菌血红蛋白简述 | 第18页 |
| ·透明颤菌血红蛋白的结构与特征 | 第18-19页 |
| ·透明颤菌血红蛋白在毕赤酵母表达系统中的应用 | 第19-20页 |
| ·分子伴侣概述 | 第20-21页 |
| ·分子伴侣简述 | 第20页 |
| ·蛋白质二硫键异构酶(PDI) | 第20页 |
| ·结合免疫球蛋白(Bip) | 第20-21页 |
| ·伴侣蛋白PDI、Bip在毕赤酵母表达系统中的应用 | 第21页 |
| ·研究目的和意义 | 第21-22页 |
| ·研究内容 | 第22-24页 |
| 第2章 β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中的优化表达 | 第24-40页 |
| ·引言 | 第24页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·实验菌株 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-26页 |
| ·种子培养方法 | 第25-26页 |
| ·发酵罐发酵工艺 | 第26页 |
| ·分析方法 | 第26-27页 |
| ·细胞质量浓度测定方法 | 第26页 |
| ·β-甘露聚糖酶酶活力测定方法 | 第26页 |
| ·甘油测定方法 | 第26-27页 |
| ·计算方法 | 第27页 |
| ·结果与讨论 | 第27-38页 |
| ·碳源种类及浓度对毕赤酵母产β-甘露聚糖酶酶活力的影响 | 第27-28页 |
| ·无机盐的种类及浓度对毕赤酵母产β-甘露聚糖酶酶活力的影响 | 第28-29页 |
| ·微量元素浓度对毕赤酵母产β-甘露聚糖酶酶活力的影响 | 第29页 |
| ·接种量对毕赤酵母产β-甘露聚糖酶酶活力的影响 | 第29-30页 |
| ·摇瓶实验中诱导阶段甲醇补料量对赤酵母产β-甘露聚糖酶酶活力的影响 | 第30-31页 |
| ·诱导温度对赤酵母产β-甘露聚糖酶酶活力的影响 | 第31页 |
| ·pH对赤酵母产β-甘露聚糖酶酶活力的影响 | 第31-32页 |
| ·30 L发酵罐条件下,不同菌体浓度对赤酵母产β-甘露聚糖酶酶活力的影响 | 第32-33页 |
| ·30 L发酵罐诱导阶段,发酵液中甲醇浓度对赤酵母产β-甘露聚糖酶酶活力的影响 | 第33-34页 |
| ·诱导阶段,DO值对赤酵母产β-甘露聚糖酶酶活力的影响 | 第34-35页 |
| ·30 L发酵罐诱导阶段甲醇补料方式优化 | 第35-36页 |
| ·发酵条件正交优化 | 第36页 |
| ·最优发酵工艺下参数分析 | 第36-37页 |
| ·摇瓶发酵与发酵罐高密度发酵蛋白电泳图 | 第37-38页 |
| ·本章小结 | 第38-40页 |
| 第3章 甘露聚糖酶复合保护剂的研究 | 第40-46页 |
| ·引言 | 第40-41页 |
| ·实验材料与设备 | 第41页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-42页 |
| ·β-甘露聚糖酶活力测定 | 第41页 |
| ·单一保护剂对酶活保护性的筛选 | 第41页 |
| ·复合保护剂配比的正交设计 | 第41-42页 |
| ·复合保护剂存在时β-甘露聚糖酶最适反应温度的测定 | 第42页 |
| ·结果与讨论 | 第42-45页 |
| ·单一保护剂对β-甘露聚糖酶稳定性的影响 | 第42-44页 |
| ·复合保护剂对β-甘露聚糖酶稳定性的影响 | 第44页 |
| ·复合保护剂对β-甘露聚糖酶热稳定性的影响 | 第44-45页 |
| ·本章小结 | 第45-46页 |
| 第4章 共表达透明颤菌血红蛋白对毕赤酵母产β-甘露聚糖酶发酵过程的影响 | 第46-60页 |
| ·引言 | 第46-47页 |
| ·实验材料与设备 | 第47-48页 |
| ·实验材料 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·仪器设备 | 第47页 |
| ·培养基 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-51页 |
| ·透明颤菌血红蛋白(VHb)基因克隆 | 第48-49页 |
| ·VHb表达载体的构建 | 第49-50页 |
| ·VHb重组表达载体的线性化与浓缩 | 第50页 |
| ·毕赤酵母电转化感受态细胞的制备与转化 | 第50页 |
| ·共表达VHb毕赤酵母工程菌的筛选 | 第50-51页 |
| ·共表达VHb菌株在30 L发酵罐条件下的发酵研究 | 第51页 |
| ·结果与分析 | 第51-57页 |
| ·透明颤菌血红蛋白基因的分析与克隆 | 第51-53页 |
| ·VHb基因PCR扩增产物及重组克隆质粒的鉴定 | 第53-54页 |
| ·胞内VHb蛋白表达及蛋白活性鉴定 | 第54-55页 |
| ·低溶氧条件下VHb对高密度发酵产β-甘露聚糖酶的影响 | 第55页 |
| ·不同甲醇添加量对VHb重组菌产β-甘露聚糖酶的影响 | 第55-57页 |
| ·本章小结 | 第57-60页 |
| 第5章 共表达伴侣蛋白对毕赤酵母产β-甘露聚糖酶发酵过程的影响 | 第60-70页 |
| ·引言 | 第60页 |
| ·实验材料与设备 | 第60-61页 |
| ·实验材材料 | 第60页 |
| ·试剂 | 第60-61页 |
| ·仪器设备 | 第61页 |
| ·培养基 | 第61页 |
| ·实验方法 | 第61-64页 |
| ·伴侣蛋白PDI、Bip基因克隆 | 第61-62页 |
| ·VHb表达载体的构建 | 第62-63页 |
| ·VHb重组表达载体的线性化与浓缩 | 第63-64页 |
| ·毕赤酵母电转化感受态细胞的制备与转化 | 第64页 |
| ·共表达VHb毕赤酵母工程菌的筛选 | 第64页 |
| ·共表达PDI、Bip菌株在30 L发酵罐条件下的发酵研究 | 第64页 |
| ·结果与分析 | 第64-67页 |
| ·Bip、PDI基因PCR扩增产物及重组质粒的鉴定 | 第64-65页 |
| ·胞内Bip、PDI蛋白表达的鉴定 | 第65-66页 |
| ·共表达伴侣蛋白对产酶和菌体生长的影响 | 第66-67页 |
| ·本章小结 | 第67-70页 |
| 第6章 总结与展望 | 第70-72页 |
| ·总结 | 第70页 |
| ·展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
| 在校期间发表论文 | 第82页 |
