| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-20页 |
| ·10-HDA简介 | 第10-16页 |
| ·10-HDA研究概况 | 第10-11页 |
| ·10-HDA的作用 | 第11-14页 |
| ·10-HDA的生产途径 | 第14-16页 |
| ·工蜂合成10-HDA相关途径及关键酶 | 第16-17页 |
| ·课题研究背景及研究内容 | 第17-20页 |
| ·立题背景 | 第17-18页 |
| ·研究内容 | 第18-20页 |
| 第2章 10-HDA生物合成相关酶基因重组表达载体的构建 | 第20-38页 |
| ·引言 | 第20页 |
| ·实验材料与设备 | 第20-23页 |
| ·实验材料 | 第20页 |
| ·实验药品及试剂配制 | 第20-22页 |
| ·实验仪器设备 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-31页 |
| ·蜜蜂电子转移黄素蛋白β基因和3-酮脂酰辅酶A硫解酶基因cDNA的获取 | 第23-24页 |
| ·目的基因引物设计及PCR获取 | 第24-25页 |
| ·1%琼脂糖凝胶电泳检测 | 第25-26页 |
| ·E.coli.DH5α感受态细胞的制备 | 第26页 |
| ·重组T载体的构建与转化 | 第26-27页 |
| ·重组T载体和表达载体pPIC-Z α A质粒的提取 | 第27页 |
| ·重组T载体和pPIC-Z α A质粒的双酶切和切胶回收 | 第27-29页 |
| ·重组表达载体的连接和转化 | 第29-30页 |
| ·菌落PCR鉴定筛选重组子 | 第30页 |
| ·重组子质粒双酶切鉴定与DNA测序 | 第30-31页 |
| ·结果与讨论 | 第31-36页 |
| ·PCR获取目的基因 | 第31-32页 |
| ·表达载体pPIC-Z α A的提取及目的基因的提取纯化 | 第32页 |
| ·重组子菌落PCR筛选验证 | 第32-33页 |
| ·重组表达载体的双酶切验证 | 第33-34页 |
| ·BLAST比对重组质粒的DNA序列 | 第34-36页 |
| ·本章小结 | 第36-38页 |
| 第3章 10-HDA合成相关基因在毕赤酵母中的表达 | 第38-46页 |
| ·引言 | 第38页 |
| ·实验材料与设备 | 第38-40页 |
| ·实验材料 | 第38页 |
| ·实验药品及试剂配制 | 第38-40页 |
| ·实验仪器设备 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-43页 |
| ·重组表达载体的提取、线性化与浓缩 | 第40-41页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞制备与转化 | 第41-42页 |
| ·毕赤酵母基因组提取及PCR验证 | 第42页 |
| ·高拷贝转化子的筛选 | 第42-43页 |
| ·结果和讨论 | 第43-44页 |
| ·重组表达载体的浓缩 | 第43页 |
| ·高拷贝重组毕赤酵母基因组的提取及PCR验证结果 | 第43-44页 |
| ·本章小结 | 第44-46页 |
| 第4章 外源蛋白的表达及检测 | 第46-54页 |
| ·引言 | 第46页 |
| ·实验材料与设备 | 第46-48页 |
| ·实验材料 | 第46页 |
| ·实验药品及试剂配制 | 第46-48页 |
| ·实验仪器设备 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-50页 |
| ·SDS-PAGE检测表达产物 | 第48-49页 |
| ·气质联用(GC-MS)检测胞外游离脂肪酸 | 第49-50页 |
| ·实验结果与分析 | 第50-52页 |
| ·表达产物SDS-PAGE检测结果及分析 | 第50-51页 |
| ·拟南芥硫酯酶基因重组菌胞外游离脂肪酸的测定 | 第51-52页 |
| ·本章小结 | 第52-54页 |
| 第5章 结论与展望 | 第54-56页 |
| ·结论 | 第54页 |
| ·展望 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 致谢 | 第60-62页 |
| 硕士期间发表论文 | 第62页 |
