| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-37页 |
| ·合成代谢途径的组合优化 | 第10-17页 |
| ·质粒上合成代谢途径的构建及优化策略 | 第11-15页 |
| ·多元模块工程策略 | 第15-16页 |
| ·基因组上的组合优化方法 | 第16-17页 |
| ·λ Red重组工程和多元重组技术 | 第17-27页 |
| ·λ Red重组系统的结构及原理 | 第18页 |
| ·dsDNA介导的 λ Red重组 | 第18-20页 |
| ·ssDNA介导的 λ Red重组 | 第20-22页 |
| ·MAGE技术的原理、优化及应用 | 第22-26页 |
| ·TRMR技术的原理与应用 | 第26-27页 |
| ·基因组编辑技术 | 第27-31页 |
| ·常用的基因组编辑方法简介 | 第27-28页 |
| ·CRISPR-Cas基因组编辑技术 | 第28-31页 |
| ·萜类化合物及 β-胡萝卜素的简介及生物合成 | 第31-34页 |
| ·萜类化合物简介 | 第31-32页 |
| ·β-胡萝卜素简介 | 第32页 |
| ·萜类化合物的生物合成 | 第32-34页 |
| ·选题背景及技术路线 | 第34-37页 |
| ·多元质粒工程技术的建立与应用 | 第34-35页 |
| ·基于CRISPR-Cas9的大肠杆菌基因组编辑技术的建立与应用 | 第35-37页 |
| 第二章 多元质粒工程技术的建立和应用 | 第37-70页 |
| ·实验材料 | 第37-41页 |
| ·实验方法 | 第41-52页 |
| ·实验结果与讨论 | 第52-68页 |
| ·MIPE技术的建立与优化 | 第52-56页 |
| ·利用MIPE技术优化核黄素代谢途径 | 第56-62页 |
| ·利用MIPE技术对红色荧光蛋白进行组合突变 | 第62-68页 |
| ·本章小结 | 第68-70页 |
| 第三章 大肠杆菌中CRISPR-CAS9介导的基因组编辑技术的建立 | 第70-86页 |
| ·实验材料 | 第70-71页 |
| ·实验方法 | 第71-73页 |
| ·实验结果与讨论 | 第73-84页 |
| ·CRISPR-Cas9介导的基因组编辑技术原理 | 第73-74页 |
| ·测试菌株的构建 | 第74-76页 |
| ·gRNA质粒的构建策略 | 第76-78页 |
| ·质粒消除系统和p Cas9cur质粒的构建 | 第78-83页 |
| ·利用CRISPR-Cas9系统实现高效的连续的基因组编辑 | 第83-84页 |
| ·本章小结 | 第84-86页 |
| 第四章 CRISPR-CAS9介导的基因组编辑的表征与优化 | 第86-104页 |
| ·实验材料 | 第86-87页 |
| ·实验方法 | 第87页 |
| ·实验结果与讨论 | 第87-102页 |
| ·供体DNA浓度对编辑效率的影响 | 第87-88页 |
| ·供体DNA同源臂长度对编辑效率的影响 | 第88-90页 |
| ·基因敲除和密码子替换的效率 | 第90-92页 |
| ·基因插入的效率 | 第92-93页 |
| ·同时对多个位点进行编辑的效率 | 第93-94页 |
| ·CRISPR-Cas9介导的DSB对重组效率的影响 | 第94-96页 |
| ·MMR对假阳性菌落数量的影响 | 第96-97页 |
| ·MMR对基因组编辑效率的影响 | 第97-98页 |
| ·MMR对CRISPR-Cas9系统引入的突变点的修复 | 第98-100页 |
| ·λ Red系统、recA基因和recET基因对重组效率的影响 | 第100页 |
| ·本实验开发的CRISPR-Cas9介导的基因组编辑技术的特点 | 第100-102页 |
| ·本章小结 | 第102-104页 |
| 第五章 利用CRISPR-CAS9介导的基因组编辑进行代谢工程 | 第104-128页 |
| ·实验材料 | 第104页 |
| ·实验方法 | 第104-106页 |
| ·实验结果与讨论 | 第106-126页 |
| ·在基因组中构建 β-胡萝卜素合成代谢途径 | 第106-108页 |
| ·优化MEP代谢途径提高 β-胡萝卜素产量 | 第108-112页 |
| ·优化中心碳代谢途径提高 β-胡萝卜素产量 | 第112-116页 |
| ·上游和下游代谢途径的组合优化 | 第116-126页 |
| ·本章小结 | 第126-128页 |
| 第六章 结论与展望 | 第128-131页 |
| ·主要结论 | 第128-129页 |
| ·主要创新点 | 第129页 |
| ·展望 | 第129-131页 |
| 参考文献 | 第131-142页 |
| 发表论文及参加科研情况说明 | 第142-143页 |
| 附录 | 第143-145页 |
| 致谢 | 第145-146页 |
