| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-26页 |
| 1 纤维素与燃料乙醇 | 第12-15页 |
| ·纤维素 | 第12-13页 |
| ·燃料乙醇 | 第13-15页 |
| 2 纤维素酶 | 第15-20页 |
| ·纤维酶的来源 | 第15页 |
| ·纤维酶的组成及分子结构 | 第15-17页 |
| ·纤维酶的水解及催化作用机制 | 第17页 |
| ·纤维酶的蛋白质工程研究 | 第17-20页 |
| ·纤维酶在燃料乙醇生产中的应用 | 第20页 |
| 3 纤维素酶基因的研究 | 第20-23页 |
| ·纤维酶基因的克隆 | 第20-21页 |
| ·纤维酶基因的表达 | 第21-23页 |
| 4 本论文的研究目的意义及技术路线 | 第23-26页 |
| 第二章 绿色木霉纤维素酶基因的克隆及定点突变 | 第26-37页 |
| 1 实验材料 | 第26-27页 |
| ·菌株和质粒 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·分子生物学与生物化学试剂(盒) | 第26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26-27页 |
| 2 实验方法 | 第27-32页 |
| ·绿色木霉真菌的分离鉴定 | 第27-28页 |
| ·绿色木霉基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| ·绿色木霉总RNA的提取及CDNA的合成 | 第29页 |
| ·绿色木霉总RNA的提取 | 第29页 |
| ·绿色木霉CDNA的合成 | 第29页 |
| ·纤维素酶基因引物设计及PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·纤维素酶基因定点突变 | 第30-32页 |
| 3 实验结果 | 第32-36页 |
| ·绿色木霉真菌的分离鉴定 | 第32-36页 |
| 4 讨论 | 第36-37页 |
| 第三章 绿色木霉EGⅡ,EGⅡ-MUT,CBHⅡ基因在毕赤酵母中的表达 | 第37-50页 |
| 1 实验材料 | 第37-38页 |
| ·质粒和菌株 | 第37页 |
| ·培养基 | 第37-38页 |
| ·分子生物学与生物化学试剂(盒) | 第38页 |
| ·主要仪器设备 | 第38页 |
| 2 实验方法 | 第38-44页 |
| ·毕赤酵母表达载体的构建 | 第38-40页 |
| ·毕赤酵母的电击转化 | 第40-41页 |
| ·重组毕赤酵母的筛选 | 第41页 |
| ·外源基因在毕赤酵母的诱导表达 | 第41-42页 |
| ·重组毕赤酵母表达产物的酶活力测定 | 第42-43页 |
| ·SDS-PAGE检测重组毕赤酵母表达产物 | 第43-44页 |
| 3 实验结果 | 第44-49页 |
| ·毕赤酵母表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·电击转化及毕赤酵母诱导表达 | 第45-46页 |
| ·GS115-EGⅡ-7、GS115-EGⅡ-MUT-10表达产物的内切葡聚糖酶酶活力分析比较 | 第46-47页 |
| ·GS115-CBHⅡ-2表达产物的外切葡聚糖酶酶活力分析 | 第47-48页 |
| ·重组毕赤酵母表达产物的SDS-PAGE | 第48页 |
| ·重组毕赤酵母的分子生物学鉴定 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-50页 |
| 第四章 绿色木霉纤维素基因酿酒酵母表达载体的构建 | 第50-56页 |
| 1 实验材料 | 第50页 |
| ·菌株和质粒 | 第50页 |
| ·分子生物学与生物化学试剂(盒) | 第50页 |
| ·培养基 | 第50页 |
| 2 实验方法 | 第50-53页 |
| 3 实验结果 | 第53-55页 |
| 4 讨论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61-62页 |
| 导师评阅表 | 第62页 |
