| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-25页 |
| ·微藻生物质能源研究背景 | 第10-12页 |
| ·日益严峻的能源危机与环境问题 | 第10页 |
| ·生物质能与能源微藻 | 第10-11页 |
| ·能源微藻产油的优势与存在的问题 | 第11-12页 |
| ·微藻油脂积累的特点及影响因素 | 第12-13页 |
| ·微藻产油的过程 | 第12-13页 |
| ·营养元素(Nutrients)对油脂积累的影响 | 第13页 |
| ·温度(Temperature)对微藻油脂积累的影响 | 第13页 |
| ·实验藻株的选择 | 第13-14页 |
| ·实验基因的选择 | 第14-21页 |
| ·二脂酰甘油酰基转移酶(DGAT) | 第14-15页 |
| ·二脂酰甘油酰基转移酶(DGAT)的生物信息学分析 | 第15-21页 |
| ·基因研究采用的关键技术 | 第21-24页 |
| ·基因克隆技术 | 第21-22页 |
| ·RealTime-PCR(实时荧光定量PCR)技术 | 第22-24页 |
| ·研究目的与意义 | 第24页 |
| ·技术路线 | 第24-25页 |
| 2 实验材料与方法 | 第25-38页 |
| ·实验材料与试剂 | 第25-29页 |
| ·实验微藻 | 第25页 |
| ·实验仪器 | 第25页 |
| ·工程菌株及载体 | 第25-26页 |
| ·实验用试剂 | 第26-27页 |
| ·实验主要培养基的配制 | 第27-28页 |
| ·实验中设计的引物序列 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-38页 |
| ·莱茵衣藻在HSM-N,HSM-P,HSM-S条件下生理生化反应 | 第29-30页 |
| ·CrDGAT1、CrDGAT2-1、CrDGAT2-5启动子全长的克隆 | 第30-33页 |
| ·CrDGAT1、CrDGAT2-1、CrDGAT2-5启动子删减片段的克隆 | 第33-34页 |
| ·阳性克隆载体与pArg7.8共转化莱茵衣藻CC425 | 第34-35页 |
| ·转化子启动子应答条件的筛选 | 第35页 |
| ·启动子应答区域逐步突变克隆载体构建与顺式作用元件的确定 | 第35-36页 |
| ·SYBR-Green Ⅰ荧光定量PCR分析野生藻株以及转化藻株在逆境条件的基因表达 | 第36-38页 |
| 3 实验结果 | 第38-59页 |
| ·莱茵衣藻CC124和CC425在缺氮、缺硫条件下生理生化指标 | 第38-40页 |
| ·藻株在缺氮、缺硫条件下生物量变化 | 第38页 |
| ·藻株在缺氮、缺硫条件下油脂含量变化 | 第38-39页 |
| ·藻株在缺氮、缺硫条件下藻状态及油滴显微拍照 | 第39-40页 |
| ·莱茵衣藻CrDGAT1,DGAT2-1,DGAT2-5启动子全长的克隆 | 第40-44页 |
| ·莱茵衣藻CC425总DNA的提取 | 第40-41页 |
| ·CrDGAT1,DGAT2-1,DGAT2-5启动子全长片段扩增 | 第41页 |
| ·CrDGAT1,CrDGAT2-1,CrDGAT2-5启动子全长片段与pMD18-T载体连接、转化、阳性克隆筛选 | 第41-42页 |
| ·测序结果分析 | 第42-44页 |
| ·CrDGAT1,CrDGAT2-1,CrDGAT2-5启动子5’和3’端逐步缺失片段的克隆 | 第44-47页 |
| ·CrDGAT1,CrDGAT2-1,CrDGAT2-5启动子缺失片段的扩增 | 第44-45页 |
| ·CrDGAT1,DGAT2-1,DGAT2-5启动子缺失片段较长片段的克隆 | 第45-47页 |
| ·CrDGAT1,CrDGAT2-1,CrDGAT2-5启动子长缺失片段转化CC425藻株,确定转化子反应的逆境条件 | 第47-48页 |
| ·CrDGA T2-1启动子缺失片段克隆载体的构建与数据分析 | 第48-49页 |
| ·CrDGAT2-1启动子缺失片段克隆载体的构建 | 第48页 |
| ·转化子藻株ARS酶活性分析 | 第48-49页 |
| ·CrDGAT2-1启动子-319,-247段逐步突变克隆载体构建与数据分析 | 第49-55页 |
| ·CrDGAT2-1启动子-319,-247段逐步突变引物设计 | 第49-50页 |
| ·CrDGAT2-1启动子-319,-247段逐段突变克隆载体的构建 | 第50-55页 |
| ·SYBR-Green Ⅰ荧光定量PCR检测CrDGAT1,CrDGAT2-1,CrDGAT2-5 mRNA表达水平 | 第55-59页 |
| ·在CC425正常,HSM-P,低温；CC124正常,HSM-N,条件下CrDGAT1,CrDGAT2-1,CrDGAT2-5 mRNA表达水平 | 第55-57页 |
| ·CrDGAT2-1启动子在转化藻种的mRNA表达量 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| ·关于启动子反应逆境条件的选择 | 第59页 |
| ·关于启动子应答反应区域的确定 | 第59页 |
| ·qRT-PCR分析基因的表达 | 第59-61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
