| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-21页 |
| ·副猪嗜血杆菌病概述 | 第12-15页 |
| ·病原学介绍 | 第12-13页 |
| ·流行病学 | 第13页 |
| ·致病机理 | 第13-14页 |
| ·耐药性 | 第14-15页 |
| ·ABC型转运泵研究进展 | 第15-17页 |
| ·ABC型转运泵基本概念与结构 | 第15-16页 |
| ·ABC型转运泵介导细菌和真菌耐药 | 第16-17页 |
| ·抗菌肽研究进展 | 第17-21页 |
| ·抗菌肽特点 | 第17-18页 |
| ·抗菌肽杀菌机制 | 第18-19页 |
| ·细菌对抗菌肽耐药机制 | 第19-20页 |
| ·天蚕素B（Cecropin B）研究进展 | 第20-21页 |
| 2 研究意义与目的 | 第21-22页 |
| 3 试验材料与仪器 | 第22-27页 |
| ·实验材料 | 第22-27页 |
| ·菌株、药物及载体 | 第22页 |
| ·引物 | 第22-23页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第23页 |
| ·培养基及主要抗生素的配制 | 第23-24页 |
| ·主要溶液的配制 | 第24-25页 |
| ·主要仪器 | 第25-27页 |
| 4 实验方法 | 第27-44页 |
| ·HAPS_2096 基因缺失株的构建 | 第27-33页 |
| ·重组自杀性质粒的构建 | 第27-32页 |
| ·HAPS_2096 基因缺失株的筛选 | 第32-33页 |
| ·基因缺失互补株的构建 | 第33-36页 |
| ·重组互补质粒C-pSHK3 电转化 | 第34-36页 |
| ·基因互补对照株的构建 | 第36页 |
| ·菌种的保存 | 第36页 |
| ·基因缺失株与互补株的验证 | 第36-38页 |
| ·极性效应验证 | 第36-37页 |
| ·缺失及互补验证 | 第37-38页 |
| ·生长曲线绘制 | 第38页 |
| ·对天蚕素B（CB）敏感性试验 | 第38-39页 |
| ·最小抑菌浓度（MIC）测定 | 第38页 |
| ·存活率比较法 | 第38-39页 |
| ·琼脂扩散法 | 第39页 |
| ·免疫电镜对CB在HPS中定位及细菌形态观察 | 第39-40页 |
| ·ABC转运泵周质结合蛋白（PSBP）与CB结合作用的验证 | 第40-44页 |
| ·HAPS_2096 基因克隆及原核表达 | 第40-41页 |
| ·PSBP-GST融合蛋白的纯化 | 第41页 |
| ·融合蛋白鉴定 | 第41-42页 |
| ·Far Western-blot | 第42-44页 |
| 5 结果与分析 | 第44-55页 |
| ·副猪嗜血杆菌HAPS_2096 基因及氨基酸序列分析 | 第44页 |
| ·重组质粒pK-kan的构建 | 第44-45页 |
| ·PCR验证HAPS_2096 基因缺失株 | 第45页 |
| ·HAPS_2096 基因缺失互补株的构建 | 第45-46页 |
| ·基因缺失株与互补株的验证 | 第46-49页 |
| ·极性效应验证 | 第46-47页 |
| ·缺失与互补验证 | 第47-49页 |
| ·生长曲线图 | 第49-50页 |
| ·对天蚕素B（CB）敏感性试验结果 | 第50-51页 |
| ·存活率比较法 | 第50-51页 |
| ·琼脂扩散法 | 第51页 |
| ·免疫电镜下经CB处理后HPS形态及CB定位 | 第51-53页 |
| ·ABC转运泵周质结合蛋白（PSBP）与CB结合作用的验证 | 第53-55页 |
| ·HAPS_2096 基因克隆及原核表达 | 第53-54页 |
| ·Far Western-blot结果 | 第54-55页 |
| 6 讨论 | 第55-58页 |
| ·HAPS_2096 基因缺失株与互补株的构建 | 第55-56页 |
| ·CB敏感性试验 | 第56-57页 |
| ·Far Western-blot | 第57页 |
| ·ABC转运泵介导的CB抗性 | 第57-58页 |
| 7 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-70页 |
| 附录 | 第70-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
