| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 1. 文献综述 | 第13-20页 |
| ·副猪嗜血杆菌研究进展 | 第13-15页 |
| ·副猪嗜血杆菌病概述 | 第13页 |
| ·副猪嗜血杆菌耐药性和致病机制研究进展 | 第13-15页 |
| ·Cpx双组份调控系统研究进展 | 第15-20页 |
| ·Cpx双组份调控系统概述 | 第15-17页 |
| ·Cpx双组份调控系统的激活 | 第17页 |
| ·Cpx双组份系统对细菌耐药性的调控 | 第17-19页 |
| ·Cpx双组份系统对细菌毒力的调控 | 第19-20页 |
| 2 研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 3 材料和方法 | 第21-37页 |
| ·实验材料 | 第21-25页 |
| ·菌株、质粒载体和细胞 | 第21页 |
| ·酶、试剂、试剂盒 | 第21-22页 |
| ·主要细菌培养基及抗生素的配制 | 第22页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳相关溶液 | 第22-23页 |
| ·引物 | 第23-25页 |
| ·实验方法 | 第25-37页 |
| ·副猪嗜血杆菌基因组DNA的提取 | 第25-26页 |
| ·副猪嗜血杆菌基因组RNA的提取及反转为cDNA | 第26页 |
| ·重组自杀性质粒的构建 | 第26-29页 |
| ·自然转化筛选基因缺失突变株JS0135-ΔcpxA、JS0135-ΔcpxR和JS0135-ΔcpxAR | 第29页 |
| ·RT-PCR验证基因缺失和极性效应检测 | 第29页 |
| ·细菌生长曲线的测定 | 第29-30页 |
| ·药物敏感性实验 | 第30页 |
| ·菌株生物被膜形成能力测定 | 第30-31页 |
| ·应激耐受实验 | 第31页 |
| ·OD600 值和活菌数对应关系的测定 | 第31页 |
| ·PK-15 细胞粘附实验 | 第31-32页 |
| ·吞噬实验 | 第32-33页 |
| ·荧光定量实验 | 第33-34页 |
| ·CpxR蛋白的诱导和表达 | 第34-37页 |
| 4 结果和分析 | 第37-55页 |
| ·自然转化法筛选基因缺失突变株 | 第37-41页 |
| ·重组自杀性质粒的构建及鉴定 | 第37-38页 |
| ·Cpx基因缺失突变株的筛选和PCR鉴定 | 第38-41页 |
| ·RT-PCR验证基因缺失及检测极性效应 | 第41-42页 |
| ·Cpx基因缺失株测序 | 第42页 |
| ·细菌生长曲线测定 | 第42-43页 |
| ·药物敏感性实验 | 第43-46页 |
| ·平板存活实验 | 第43-44页 |
| ·最小抑菌浓度的测定 | 第44-46页 |
| ·菌株生物被膜形成能力测定 | 第46页 |
| ·应激耐受实验 | 第46-47页 |
| ·粘附实验 | 第47-48页 |
| ·RAW和PAM吞噬实验 | 第48-49页 |
| ·实时荧光定量实验 | 第49-52页 |
| ·实时荧光定量实验 | 第49-51页 |
| ·耐药性相关基因诱导后实时荧光定量实验 | 第51页 |
| ·差异表达基因诱导前后表达量对比 | 第51-52页 |
| ·重组表达质粒的构建和CpxR蛋白的诱导表达和纯化 | 第52-55页 |
| 5 讨论 | 第55-59页 |
| ·Cpx双组份系统基因缺失株构建 | 第55页 |
| ·Cpx双组份系统和HPS耐药性相关以及可能的调控机制 | 第55-56页 |
| ·Cpx双组份系统和HPS应激耐受能力相关 | 第56页 |
| ·Cpx双组份系统对HPS粘附能力具有调控作用 | 第56-57页 |
| ·Cpx双组份系统对HPS抗吞噬能力具有调控作用 | 第57页 |
| ·副猪嗜血杆菌Cpx双组份系统可能调控的靶基因 | 第57-58页 |
| ·推测CpxR蛋白可以被其他因子磷酸化 | 第58-59页 |
| 6 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 附录 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
