| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-14页 |
| 目录 | 第14-20页 |
| 第一章 绪论 | 第20-30页 |
| ·研究背景 | 第20-27页 |
| ·H. pylori与胃癌相关性研究 | 第21-22页 |
| ·H. pylori cag致病岛 | 第22-25页 |
| ·H. pylori VacA蛋白 | 第25-26页 |
| ·H. pylori DupA蛋白 | 第26-27页 |
| ·本研究目的、内容及技术路线 | 第27-30页 |
| ·研究目的 | 第27-28页 |
| ·研究内容 | 第28页 |
| ·技术路线 | 第28-30页 |
| 第二章 胃十二指肠疾病高发区H pylori临床分离株毒力因子分子特征分析 | 第30-50页 |
| ·材料 | 第30-32页 |
| ·临床患者的筛选和标本采集 | 第30页 |
| ·标准菌株和质粒 | 第30-31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·主要试剂配制 | 第31-32页 |
| ·主要仪器设备 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-40页 |
| ·H. pylori培养和常规鉴定 | 第32-33页 |
| ·H. pylori分子鉴定 | 第33页 |
| ·组织学分析 | 第33-34页 |
| ·H. pylori DNA提取 | 第34页 |
| ·H. pylori临床分离株cagA基因状态和cagA基因3’端多态性分析 | 第34-38页 |
| ·H. pylori临床分离株cagPAI完整性及cagPAI基因序列分析 | 第38页 |
| ·H. pylori临床分离株vacA基因的多样性分析 | 第38-39页 |
| ·H. pylori临床分离株dupA基因分析 | 第39-40页 |
| ·H. pylori临床分离株相关毒力因子基因序列提交 | 第40页 |
| ·统计学分析 | 第40页 |
| ·结果 | 第40-48页 |
| ·H. pylori分离培养与鉴定 | 第40-41页 |
| ·临床患者分组 | 第41页 |
| ·H. pylori临床分离株cagA基因状态和cagA基因3’端多态性分析 | 第41-43页 |
| ·H. pylori临床分离株cagPAI完整性及cagPAI基因序列分析 | 第43-45页 |
| ·H. pylori临床分离株vacA基因的多样性检测 | 第45-46页 |
| ·H. pylori临床分离株dupA基因分析 | 第46-48页 |
| ·H.pylori临床分离株毒力因子基因序列提交 | 第48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 H.pylori dupA(2499)基因克隆及推导蛋白的生物信息学分析 | 第50-64页 |
| ·材料 | 第50-51页 |
| ·菌株和质粒 | 第50页 |
| ·主要软件及相关网站 | 第50-51页 |
| ·方法 | 第51-53页 |
| ·H.pylori培养与鉴定 | 第51页 |
| ·H.pylori DNA提取 | 第51页 |
| ·H.pylori dupA(2499)基因序列分析 | 第51-52页 |
| ·H.pylori WH-21菌株DupA(2499)蛋白生物信息学分析 | 第52-53页 |
| ·结果 | 第53-62页 |
| ·H.pylori培养与鉴定 | 第53-54页 |
| ·PCR法扩增H.pylori WH-21菌株dupA(2499)基因 | 第54页 |
| ·T-A克隆与鉴定结果 | 第54页 |
| ·H.pylori dupA(2499)基因序列分析结果 | 第54-56页 |
| ·H.pylori WH-21菌株DupA(2499)蛋白生物学信息学分析 | 第56-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 第四章 H.pylori dupA(2499)基因原核表达、ATPase活性鉴定及抗体制备 | 第64-80页 |
| ·材料 | 第64-68页 |
| ·菌株和质粒 | 第64-65页 |
| ·主要试剂 | 第65页 |
| ·主要试剂配制 | 第65-67页 |
| ·主要仪器 | 第67-68页 |
| ·方法 | 第68-74页 |
| ·dupA基因片段扩增 | 第68页 |
| ·dupA基因PCR产物的T-A连接 | 第68页 |
| ·重组质粒pMD18-T-dupA的鉴定 | 第68-69页 |
| ·重组表达质粒pET32a-dupA的构建 | 第69-70页 |
| ·重组DupA蛋白诱导条件的优化 | 第70-71页 |
| ·重组DupA蛋白的表达和纯化 | 第71页 |
| ·重组DupA蛋白SDS-PAGE、Western blotting及质谱分析 | 第71-72页 |
| ·重组DupA蛋白ATPase活性分析 | 第72-73页 |
| ·抗重组DupA蛋白多克隆抗血清的制备及效价测定 | 第73-74页 |
| ·结果 | 第74-78页 |
| ·PCR扩增dupA基因片段和序列分析 | 第74-75页 |
| ·dupA基因PCR产物的T-A连接 | 第75页 |
| ·重组质粒pMD18-T-dupA酶切鉴定和序列分析 | 第75-76页 |
| ·重组表达质粒pET32a-dupA的构建和序列分析 | 第76页 |
| ·重组DupA蛋白的诱导表达、纯化与鉴定 | 第76-77页 |
| ·重组DupA蛋ATPase活性分析 | 第77-78页 |
| ·抗重组DupA蛋白多克隆抗血清效价测定和特异性分析 | 第78页 |
| ·讨论 | 第78-80页 |
| 第五章 H.pylori DupA(2499)蛋白亚细胞定位及互作蛋白分析 | 第80-86页 |
| ·材料 | 第80-81页 |
| ·菌株和质粒 | 第80页 |
| ·仪器 | 第80页 |
| ·主要试剂 | 第80-81页 |
| ·主要溶液配制 | 第81页 |
| ·方法 | 第81-84页 |
| ·H.pylori亚细胞成分分离 | 第81-82页 |
| ·H.pylori DupA(2499)蛋白定位 | 第82页 |
| ·H.pylori DupA(2499)蛋白的互作蛋白分析 | 第82-83页 |
| ·免疫共沉淀中DupA(2499)蛋白和互作蛋白的验证 | 第83-84页 |
| ·结果 | 第84-85页 |
| ·DupA(2499)蛋白亚细胞定位 | 第84页 |
| ·免疫共沉淀实验和质谱分析 | 第84页 |
| ·免疫共沉淀中DupA(2499)蛋白和互作蛋白的验证 | 第84-85页 |
| ·讨论 | 第85-86页 |
| 第六章 H.pylori dupA(2499)基因缺失株的构建和验证 | 第86-96页 |
| ·材料 | 第86-87页 |
| ·菌株和质粒 | 第86页 |
| ·主要试剂 | 第86页 |
| ·主要溶液 | 第86-87页 |
| ·主要仪器 | 第87页 |
| ·方法 | 第87-90页 |
| ·自杀质粒同源臂的扩增和序列分析 | 第87-88页 |
| ·自杀质粒pBluescript/△dupA::KM~r的构建 | 第88-89页 |
| ·H.pylori dupA(2499)基因缺失株的构建 | 第89页 |
| ·H.pylori dupA(2499)基因缺失株的验证 | 第89-90页 |
| ·结果 | 第90-93页 |
| ·自杀质粒同源臂的扩增和序列分析 | 第90-91页 |
| ·dupA(2499)基因缺失自杀质粒的构建 | 第91-92页 |
| ·H.pylori dupA(2499)基因缺失株构建与鉴定 | 第92-93页 |
| ·讨论 | 第93-96页 |
| 第七章 H.pylori dupA(2499)基因缺失株生物学性状及相关功能学研究 | 第96-112页 |
| ·材料 | 第96-97页 |
| ·菌株、质粒和细胞株 | 第96页 |
| ·主要试剂 | 第96-97页 |
| ·主要溶液 | 第97页 |
| ·方法 | 第97-102页 |
| ·H.pylori dupA(2499)基因缺失株的菌落特点和镜下形态观察 | 第97页 |
| ·H.pylori dupA(2499)基因的缺失对酸性环境抵抗力的影响 | 第97-98页 |
| ·H.pylori dupA(2499)基因的缺失对脲酶分泌的影响 | 第98页 |
| ·H.pylori dupA(2499)基因缺失株毒力分析 | 第98-99页 |
| ·H.pylori dupA(2499)基因缺失对CagA蛋白转运的影响 | 第99页 |
| ·H.pylori dupA(2499)基因的缺失对粘附功能的影响 | 第99-100页 |
| ·H.pylori dupA(2499)基因缺失株对MKN-45细胞的影响 | 第100-101页 |
| ·统计分析 | 第101-102页 |
| ·结果 | 第102-108页 |
| ·H.pylori dupA(2499)基因缺失株菌落和镜下形态特征 | 第102页 |
| ·H.pylori dupA(2499)基因的缺失对酸性环境抵抗力的影响 | 第102-103页 |
| ·H.pylori dupA(2499)基因缺失对脲酶分泌的影响 | 第103页 |
| ·H.pylori和GES-1细胞共培养上清液IL-8浓度分析 | 第103-104页 |
| ·H.pylori dupA(2499)基因缺失对CagA蛋白转运的影响 | 第104页 |
| ·H.pylori dupA(2499)基因缺失对H.pylori粘附功能的影响 | 第104-105页 |
| ·H.pylori dupA(2499)基因缺失株对MKN-45细胞的影响 | 第105-108页 |
| ·讨论 | 第108-112页 |
| 第八章 主要结论、展望及研究不足 | 第112-114页 |
| ·主要结论 | 第112页 |
| ·展望 | 第112-113页 |
| ·研究不足 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
| 攻读博士期间发表论文与参加课题 | 第127页 |
