| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-21页 |
| ·阿魏酸酯酶简介 | 第13-16页 |
| ·分类与结构 | 第13-14页 |
| ·性质 | 第14-15页 |
| ·应用 | 第15-16页 |
| ·阿魏酸酯酶的产生菌 | 第16-18页 |
| ·原核生物 | 第16-17页 |
| ·真核生物 | 第17-18页 |
| ·阿魏酸酯酶异源表达体系 | 第18-20页 |
| ·原核表达体系 | 第18-19页 |
| ·真核表达体系 | 第19-20页 |
| ·论文研究立题背景和内容 | 第20-21页 |
| 第2章 一株产阿魏酸酯酶细菌的鉴定 | 第21-37页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·菌株 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| ·试剂 | 第22-23页 |
| ·仪器 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-28页 |
| ·细菌 A216 的形态学鉴定 | 第23-24页 |
| ·生理生化鉴定 | 第24-26页 |
| ·分子生物学鉴定 | 第26-28页 |
| ·实验结果与分析 | 第28-35页 |
| ·形态学鉴定结果 | 第28-29页 |
| ·生理生化鉴定结果 | 第29-31页 |
| ·16S rDNA 序列分析 | 第31-33页 |
| ·ITS 序列分析 | 第33-35页 |
| ·本章小结 | 第35-37页 |
| 第3章 Burkholderia fungorum 基因组文库法筛选阿魏酸酯酶基因 | 第37-47页 |
| ·实验材料 | 第37-38页 |
| ·菌株 | 第37页 |
| ·培养基 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37-38页 |
| ·仪器 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-41页 |
| ·基因组 DNA 提取与检测 | 第38-39页 |
| ·Sau3AI 酶切基因组 DNA 浓度优化 | 第39页 |
| ·Sau3AI 酶切基因组 DNA 时间优化 | 第39页 |
| ·基因组 DNA 大量酶切 | 第39-40页 |
| ·BamHⅠ酶切 pUC19 载体和去磷酸化 | 第40页 |
| ·基因组文库的建立、筛选和鉴定 | 第40-41页 |
| ·实验结果与分析 | 第41-45页 |
| ·基因组 DNA 的提取与检测 | 第41-42页 |
| ·Sau3AI 对基因组 DNA 的部分酶切 | 第42-43页 |
| ·pUC19 载体的处理 | 第43-44页 |
| ·基因组文库筛选和评价 | 第44-45页 |
| ·本章总结 | 第45-47页 |
| 第4章 土曲霉阿魏酸酯酶基因的获得及异源表达载体的构建 | 第47-71页 |
| ·实验材料 | 第47-49页 |
| ·菌株 | 第47页 |
| ·培养基 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47-48页 |
| ·仪器 | 第48-49页 |
| ·实验方法 | 第49-60页 |
| ·克隆不含信号肽的土曲霉阿魏酸酯酶基因 | 第49-54页 |
| ·重叠拼接 PCR 技术去除土曲霉阿魏酸酯酶的内含子基因 | 第54-57页 |
| ·大肠杆菌表达载体 pET22b-fae 的构建 | 第57-58页 |
| ·毕赤酵母表达载体 pPICZαA-FAE 的构建 | 第58-60页 |
| ·实验结果与分析 | 第60-70页 |
| ·克隆不含信号肽的土曲霉阿魏酸酯酶基因 | 第60-62页 |
| ·重叠延伸 PCR 去除土曲霉阿魏酸酯酶的内含子基因 | 第62-64页 |
| ·表达载体 pET22b-fae 的构建 | 第64-66页 |
| ·表达载体 pPICZαA-FAE 的构建 | 第66-70页 |
| ·本章小结 | 第70-71页 |
| 第5章 阿魏酸酯酶在大肠杆菌中的表达 | 第71-87页 |
| ·实验材料 | 第71-74页 |
| ·菌株 | 第71页 |
| ·培养基 | 第71页 |
| ·试剂 | 第71-73页 |
| ·仪器 | 第73-74页 |
| ·实验方法 | 第74-78页 |
| ·质粒 pET22b-fae 转化大肠杆菌 BL21(DE3) | 第74页 |
| ·大肠杆菌转化子的发酵 | 第74-76页 |
| ·大肠杆菌转化子在 LB 培养基中发酵条件的优化 | 第76-77页 |
| ·阿魏酸酯酶性质研究 | 第77-78页 |
| ·实验结果与分析 | 第78-85页 |
| ·大肠杆菌转化子的鉴定 | 第78页 |
| ·大肠杆菌转化子初步发酵的酶活和 SDS-PAGA 电泳 | 第78-80页 |
| ·大肠杆菌转化子在 LB 培养基中发酵条件的优化 | 第80-82页 |
| ·阿魏酸酯酶性质研究 | 第82-85页 |
| ·本章小结 | 第85-87页 |
| 第6章 阿魏酸酯酶在毕赤酵母中的表达 | 第87-95页 |
| ·实验材料 | 第87-88页 |
| ·菌株 | 第87页 |
| ·培养基 | 第87页 |
| ·试剂 | 第87-88页 |
| ·仪器 | 第88页 |
| ·实验方法 | 第88-91页 |
| ·质粒 pPICZαA-FAE 的线性化 | 第88-89页 |
| ·毕赤酵母 GS115 感受态细胞制备 | 第89页 |
| ·毕赤酵母电转化 | 第89-90页 |
| ·毕赤酵母转化子的的鉴定 | 第90页 |
| ·毕赤酵母转化子的发酵 | 第90-91页 |
| ·实验结果与分析 | 第91-93页 |
| ·表达载体 pPICZαA-FAE 的线性化 | 第91页 |
| ·电转化结果 | 第91-92页 |
| ·毕赤酵母转化子的鉴定 | 第92页 |
| ·毕赤酵母转化子发酵的酶活和 SDS-PAGA 电泳 | 第92-93页 |
| ·本章小结 | 第93-95页 |
| 全文总结与展望 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-103页 |
| 致谢 | 第103-105页 |
| 在学期间主要科研成果 | 第105页 |
