| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-17页 |
| ·氨基葡萄糖的介绍 | 第10-12页 |
| ·氨基葡萄糖的性质 | 第10页 |
| ·氨基葡萄糖的应用 | 第10-11页 |
| ·氨基葡萄糖的生产方法 | 第11-12页 |
| ·氨基葡萄糖的检测方法 | 第12页 |
| ·产氨基葡萄糖代谢途径的介绍 | 第12-13页 |
| ·大肠杆菌表达系统的优势 | 第13-15页 |
| ·大肠杆菌表达系统的组成 | 第13页 |
| ·大肠杆菌系统中表达的影响因素 | 第13-15页 |
| ·论文选题题的背景及思路 | 第15-17页 |
| ·论文选题的背景 | 第15页 |
| ·论文的研究思路 | 第15-17页 |
| 第2章 氨基葡萄糖乙酰化酶基因的克隆 | 第17-35页 |
| ·引言 | 第17页 |
| ·实验材料 | 第17-20页 |
| ·实验菌株与质粒 | 第17-18页 |
| ·主要仪器 | 第18页 |
| ·分子生物学试剂 | 第18-19页 |
| ·主要生化试剂 | 第19页 |
| ·培养基配制 | 第19页 |
| ·主要试剂的配制 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-27页 |
| ·酿酒酵母 DNA 提取及琼脂糖凝胶电泳检测 | 第20-21页 |
| ·大肠杆菌质粒 DNA 提取 | 第21-22页 |
| ·引物的设计 | 第22页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第22-23页 |
| ·氨基葡萄糖乙酰化酶基因的 PCR 扩增与产物的纯化 | 第23-24页 |
| ·双酶切质粒与目的基因 | 第24-25页 |
| ·载体与目的基因的连接 | 第25页 |
| ·转化 | 第25页 |
| ·转化子的筛选和鉴定 | 第25-26页 |
| ·重组质粒双酶切鉴定 | 第26页 |
| ·重组质粒的序列分析 | 第26页 |
| ·重组质粒外源蛋白表达分析 | 第26-27页 |
| ·结果与讨论 | 第27-34页 |
| ·酿酒酵母 DNA 提取和 pET24a 质粒提取 | 第27-28页 |
| ·PCR 克隆 gnaI 基因片段 | 第28-29页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第29页 |
| ·双酶切判断连接比例 | 第29-30页 |
| ·转化 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的提取和双酶切 | 第31页 |
| ·重组质粒的序列分析 | 第31-34页 |
| ·重组质粒表达外源蛋白分析 | 第34页 |
| ·本章小结 | 第34-35页 |
| 第3章 氨基葡萄糖合酶基因的克隆 | 第35-51页 |
| ·引言 | 第35页 |
| ·实验材料 | 第35-37页 |
| ·实验菌株与质粒 | 第35-36页 |
| ·主要实验仪器 | 第36页 |
| ·分子生物学试剂 | 第36页 |
| ·主要生化试剂 | 第36-37页 |
| ·培养基配制 | 第37页 |
| ·主要试剂的配制 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-41页 |
| ·枯草芽孢杆菌 DNA 提取及琼脂糖凝胶检测 | 第37-38页 |
| ·大肠杆菌 pET24a-gnaI 质粒 DNA 提取 | 第38页 |
| ·引物设计 | 第38页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第38页 |
| ·氨基葡萄糖合酶基因 PCR 产物扩增与纯化 | 第38-39页 |
| ·双酶切质粒与目的基因 | 第39-40页 |
| ·载体与目的基因的连接 | 第40页 |
| ·转化 | 第40页 |
| ·转化子的筛选和鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组质粒提取与双酶切鉴定 | 第41页 |
| ·重组质粒的序列分析 | 第41页 |
| ·重组质粒外源蛋白表达分析 | 第41页 |
| ·重组质粒 pET24a—gnaI‐GlmS 的构建结果检测 | 第41-50页 |
| ·枯草芽孢杆菌 DNA 提取和 pET24a-gnaI 质粒提取 | 第41-42页 |
| ·PCR 克隆 Glms 基因片段 | 第42页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第42-43页 |
| ·双酶切回收 PCR 产物和质粒 | 第43-44页 |
| ·重组质粒转化 | 第44-45页 |
| ·重组质粒提取和双酶切 | 第45页 |
| ·重组质粒的序列分析 | 第45-49页 |
| ·重组质粒表达外源蛋白分析 | 第49-50页 |
| ·本章小结 | 第50-51页 |
| 第4章 产氨基葡萄糖基因工程菌发酵条件的研究 | 第51-65页 |
| ·引言 | 第51页 |
| ·实验材料 | 第51-54页 |
| ·主要试剂 | 第51页 |
| ·主要仪器 | 第51-52页 |
| ·培养基的确定 | 第52页 |
| ·试剂配制方法 | 第52页 |
| ·氨基葡萄糖和乙酰氨基葡萄糖检测方法 | 第52-54页 |
| ·重组菌的发酵 | 第54-63页 |
| ·重组菌的培养方式 | 第54-55页 |
| ·培养基单因素优化实验 | 第55-60页 |
| ·最优条件发酵实验 | 第60-61页 |
| ·发酵罐优化发酵培养 | 第61-63页 |
| ·本章小结 | 第63-65页 |
| 第5章 结论和展望 | 第65-66页 |
| ·结论 | 第65页 |
| ·展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 在学期间主要科研成果 | 第72页 |
