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大肠杆菌转位酶MraY单克隆抗体的制备与特性研究

摘要第1-5页
Abstract第5-9页
英文缩略表第9-10页
第一章 文献综述第10-32页
   ·转位酶Ⅰ(MRAY)的生物化学第11-20页
     ·转位酶Ⅰ(MRAY)作用的发现第11-12页
     ·MRAY 基因的鉴定第12页
     ·MRAY 一级和二级结构的分析第12-14页
     ·MRAY 的酶学特性第14-20页
   ·MRAY 的天然抑制剂第20-27页
     ·转移酶Ⅰ的核苷酸类抑制剂第20-26页
     ·转移酶 I 的环肽类抑制第26-27页
     ·转移酶 I 的其他小分子抑制剂第27页
   ·噬菌体 PHI X174 裂解蛋白 E 对转移酶 I 的抑制第27-28页
   ·MRAY 的高通量分析的发展第28-32页
第二章 抗 MRAY-AB 蛋白单克隆抗体的制备与纯化第32-46页
   ·材料第32页
     ·菌株、质粒、细胞和实验动物第32页
     ·主要仪器第32页
     ·主要试剂和药品第32页
   ·方法第32-39页
     ·蛋白纯化第32-34页
     ·动物免疫第34-35页
     ·ELISA 方法检测血清效价第35页
     ·SP2/0 细胞的制备第35-36页
     ·饲养层细胞的制备第36页
     ·免疫脾细胞的制备第36页
     ·细胞融合第36-37页
     ·杂交瘤细胞的筛选第37页
     ·杂交瘤细胞的亚克隆第37-38页
     ·杂交瘤细胞的冻存与复苏第38页
     ·单克隆抗体的大量制备第38页
     ·单克隆抗体的纯化第38-39页
   ·结果第39-43页
     ·重组质粒转化的 PCR 鉴定第39-40页
     ·MRAY-AB 蛋白的表达第40页
     ·MRAY-AB 蛋白的纯化第40-41页
     ·免疫血清效价检测第41-42页
     ·M-H11 单克隆细胞株腹水效价的检测第42页
     ·纯化单抗 M-H11 的 SDS-PAGE 检测第42-43页
     ·单克隆抗体的 WESTERN-BLOT 检测第43页
   ·讨论第43-46页
     ·动物的免疫第43-44页
     ·筛选体系的建立第44页
     ·融合细胞的制备第44-46页
第三章 抗 MRAY 单抗的特性研究第46-70页
   ·材料第46-47页
     ·菌株和质粒第46页
     ·单抗和实验动物第46页
     ·主要仪器第46页
     ·主要试剂药品第46-47页
     ·引物设计第47页
   ·方法第47-59页
     ·M-H11 的亚类鉴定第47页
     ·M-H11 的表位筛选第47-51页
     ·表位多肽的合成第51-52页
     ·单抗 M-H11 抑制 E.COLI BL21(DE3)PLYSS 生长的试验第52-53页
     ·单抗 M-H11 体外抑制野生型 E.COLI 耐药菌株生长的试验第53-54页
     ·单抗 M-H11 体外抑制 E.COLI DH5Α生长的试验第54页
     ·单抗 M-H11 体外抑制 DH5Α(△OMPT)生长的试验第54-58页
     ·单抗 M-H11 体外抑制 E.COLI BL21(DE3)生长的试验第58页
     ·单抗体外抑制 PLYSS/E.COLI BL21(DE3)实验第58-59页
   ·结果第59-67页
     ·M-H11 单抗的亚类鉴定结果第59页
     ·扩增噬菌体储液对 M-H11 结合的 ELISA 检测结果第59-60页
     ·阳性噬菌体克隆测序及同源性比对结果第60页
     ·蛋白 MRAY 表位多肽与 M-H11 单抗的反应第60-61页
     ·蛋白 MRAY 表位多肽对 MRAY-AB 蛋白的竞争抑制第61页
     ·M-H11 单抗对 E.COLI BL21(DE3)PLYSS 的体外抑制结果第61-62页
     ·M-H11 单抗对 E.COLI BL21(DE3)PLYSS 的体内抑制结果第62-63页
     ·M-H11 单抗对野生型耐药 E.COLI 的体外抑制结果第63页
     ·M-H11 单抗对 E.COLI DH5Α的体外抑制结果第63-64页
     ·M-H11 单抗对 E.COLI DH5Α(△OMPT)的体外抑制结果第64-66页
     ·M-H11 单抗对 E.COLI BL21(DE3)的体外抑制结果第66-67页
     ·M-H11 单抗对 PLYSS/E.COLI BL21(DE3)的体外抑制结果第67页
   ·讨论第67-70页
第四章 结论第70-72页
参考文献第72-78页
致谢第78-80页
附录第80-82页
个人简历第82页

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