| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 英文缩略语表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| ·引言 | 第11-12页 |
| ·产气荚膜梭菌概述 | 第12-21页 |
| ·产气荚膜梭菌主要毒素研究进展 | 第13-15页 |
| ·产气荚膜梭菌的分型及其感染机制 | 第15-18页 |
| ·牛肠毒血症研究进展 | 第18-19页 |
| ·产气荚膜梭菌引起的牛猝死症研究进展 | 第19-20页 |
| ·牛产气荚膜梭菌疫苗研究进展 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 产气荚膜梭菌α和ε毒素基因原核表达质粒的构建 | 第23-39页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·细菌菌株和质粒载体 | 第23页 |
| ·工具酶与主要生化试剂 | 第23页 |
| ·试剂盒以及其它 | 第23页 |
| ·实验用主要仪器设备及来源 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-30页 |
| ·菌种的复苏培养 | 第24-25页 |
| ·主要生物学特性检测 | 第25页 |
| ·引物设计与合成 | 第25-26页 |
| ·α和ε毒素基因的 T-A 克隆 | 第26-29页 |
| ·α和ε毒素蛋白原核表达质粒 pET28a-α和 pET28a-ε构建 | 第29-30页 |
| ·结果 | 第30-36页 |
| ·细菌培养特性及染色镜检 | 第30页 |
| ·细菌主要生化试验检测结果 | 第30-31页 |
| ·α毒素和ε毒素基因片段的 PCR 扩增结果 | 第31页 |
| ·α和ε毒素基因重组子 T-A 克隆的 PCR 及双酶切鉴定结果 | 第31-32页 |
| ·α毒素和ε毒素基因的序列分析结果 | 第32-35页 |
| ·PCR 产物双酶切鉴定及测序结果 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-39页 |
| 第三章 产气荚膜梭菌α-ε融合基因原核表达质粒的构建 | 第39-47页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·细菌菌株和质粒载体 | 第39页 |
| ·工具酶与主要生化试剂 | 第39页 |
| ·试剂盒以及其它 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-41页 |
| ·引物设计与合成 | 第39页 |
| ·插入片段α-Linker 的制备 | 第39-40页 |
| ·质粒 pET28a-ε的线性化 | 第40页 |
| ·α-Linker 基因片段与线性化质粒 pET28a-ε的连接 | 第40-41页 |
| ·连接产物的转化 | 第41页 |
| ·鉴定 | 第41页 |
| ·再转化 | 第41页 |
| ·结果 | 第41-46页 |
| ·α-Linker 基因片段的 PCR 扩增结果 | 第41-42页 |
| ·质粒 pET28a-α-ε的 PCR 及双酶切鉴定结果 | 第42-43页 |
| ·α-ε融合基因的序列分析结果 | 第43-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| 第四章 重组α、ε和α-ε蛋白的诱导表达、纯化及 Western Blotting 检测 | 第47-57页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·细菌菌株 | 第47页 |
| ·主要生化试剂 | 第47页 |
| ·试剂盒以及其它 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-51页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第47-49页 |
| ·重组蛋白的表达形式分析 | 第49-50页 |
| ·重组白的纯化 | 第50页 |
| ·重组蛋白纯化后浓度测定 | 第50页 |
| ·重组蛋白的 Western Blotting 检测 | 第50-51页 |
| ·结果 | 第51-55页 |
| ·重组蛋白的诱导表达结果 | 第51-53页 |
| ·重组蛋白的表达形式分析结果 | 第53-54页 |
| ·重组蛋白的纯化结果 | 第54页 |
| ·重组蛋白的 Western Blotting 检测结果 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 第五章 重组蛋白的免疫保护性研究 | 第57-67页 |
| ·材料 | 第57页 |
| ·细菌菌株 | 第57页 |
| ·实验动物 | 第57页 |
| ·主要生化试剂 | 第57页 |
| ·试剂盒以及其它 | 第57页 |
| ·方法 | 第57-60页 |
| ·免疫原的制备 | 第57-58页 |
| ·动物免疫 | 第58页 |
| ·间接 ELISA 检测免疫动物抗体水平 | 第58-59页 |
| ·细胞因子检测 | 第59页 |
| ·小鼠攻毒保护试验 | 第59-60页 |
| ·结果 | 第60-63页 |
| ·重组菌株毒性的测定结果 | 第60页 |
| ·小鼠免疫后血清中 IgG 抗体检测结果 | 第60-61页 |
| ·细胞因子检测结果 | 第61-62页 |
| ·小鼠攻毒实验结果 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-67页 |
| 第六章 结论 | 第67-69页 |
| 附录 | 第69-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
| 作者简历 | 第85页 |
