| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-17页 |
| ·普鲁兰酶概述 | 第9页 |
| ·普鲁兰酶的研究进展 | 第9-11页 |
| ·普鲁兰酶主要的产生菌种 | 第9-10页 |
| ·普鲁兰酶的异源表达研究 | 第10-11页 |
| ·大肠杆菌 pET 表达系统 | 第11-13页 |
| ·pET 系统中外源蛋白的诱导表达原理 | 第12页 |
| ·对表达系统稳定性缺陷起因的研究 | 第12-13页 |
| ·提高 pET 系统稳定性的策略 | 第13页 |
| ·重组蛋白在大肠杆菌表达系统中的胞外生产 | 第13-14页 |
| ·重组蛋白分泌表达的优势 | 第13-14页 |
| ·培养基添加剂在促进重组蛋白胞外分泌中的应用 | 第14页 |
| ·自诱导方式简介 | 第14-15页 |
| ·本研究的意义 | 第15-16页 |
| ·本论文的具体研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-25页 |
| ·实验材料 | 第17-19页 |
| ·菌株与质粒 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17-18页 |
| ·培养基与溶液 | 第18-19页 |
| ·主要仪器 | 第19页 |
| ·实验方法 | 第19-25页 |
| ·大肠杆菌表达系统的构建 | 第19-21页 |
| ·含有 lac 操纵子的两种重组表达质粒的构建 | 第21页 |
| ·重组蛋白的 IPTG 诱导表达及其诱导条件的优化 | 第21-22页 |
| ·三株重组菌的本底表达水平的比较 | 第22页 |
| ·三株重组菌的冷冻甘油管稳定性的比较 | 第22页 |
| ·在自诱导培养基中发酵产重组普鲁兰酶 | 第22页 |
| ·细胞组分分级分离 | 第22页 |
| ·温度和 pH 对重组酶酶活力的影响 | 第22-23页 |
| ·普鲁兰酶酶活的测定 | 第23-24页 |
| ·表达产物的 SDS-PAGE 分析 | 第24-25页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第25-48页 |
| ·大肠杆菌分泌型表达系统的构建及诱导条件的优化 | 第25-30页 |
| ·普鲁兰酶基因的克隆表达 | 第25-26页 |
| ·重组酶的最适温度和最适 pH | 第26-27页 |
| ·诱导温度对胞内外重组酶酶活的影响 | 第27-28页 |
| ·IPTG 浓度对胞内外重组酶酶活的影响 | 第28页 |
| ·诱导时机对胞内外重组酶酶活的影响 | 第28-29页 |
| ·最佳诱导条件下的发酵过程曲线 | 第29-30页 |
| ·添加剂对重组酶胞外分泌的影响 | 第30-35页 |
| ·重组酶在大肠杆菌细胞中的定位 | 第30-31页 |
| ·破坏细胞结构的添加剂对重组酶分泌的影响 | 第31-33页 |
| ·渗透压调节剂 Na~+的浓度和添加时机对重组酶分泌的影响 | 第33-34页 |
| ·甘氨酸和 Na~+复合作用对重组酶分泌的影响 | 第34页 |
| ·Ca~(2+)的添加对分泌的影响 | 第34-35页 |
| ·提高大肠杆菌表达系统稳定性的策略 | 第35-41页 |
| ·重组大肠杆菌稳定性缺陷的发现 | 第35-37页 |
| ·两种含有 lac 操纵子的重组表达质粒的构建 | 第37-38页 |
| ·三株重组菌的本底表达水平的比较 | 第38-39页 |
| ·冷冻甘油管稳定性的比较 | 第39-40页 |
| ·自诱导培养基中发酵结果的比较 | 第40-41页 |
| ·应用自诱导培养基发酵生产普鲁兰酶的研究 | 第41-48页 |
| ·在自诱导培养基中的初步发酵过程曲线 | 第41-43页 |
| ·诱导温度对胞内外重组酶酶活的影响 | 第43-44页 |
| ·甘氨酸终浓度对产胞外重组酶的影响 | 第44-45页 |
| ·切换培养温度的时机对产胞外重组酶的影响 | 第45-46页 |
| ·乳糖浓度对产胞外重组酶的影响 | 第46-48页 |
| 主要结论与展望 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第56页 |