| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 目录 | 第9-14页 |
| 引言 | 第14-15页 |
| 1 文献综述 | 第15-34页 |
| ·TMC的研究进展 | 第15-19页 |
| ·TMC简介 | 第15页 |
| ·TMC的生物合成机制 | 第15-17页 |
| ·TMC的生物活性 | 第17-19页 |
| ·蛋白磷酸酶的研究进展 | 第19-23页 |
| ·蛋白磷酸酶PP1 | 第19-20页 |
| ·蛋白磷酸酶PP2A | 第20-21页 |
| ·蛋白磷酸酶PP5 | 第21-22页 |
| ·蛋白磷酸酶抑制剂的致癌与抗癌活性 | 第22-23页 |
| ·细胞周期与细胞凋亡 | 第23-29页 |
| ·细胞周期概述 | 第23-24页 |
| ·细胞周期的分子基础与调控 | 第24-26页 |
| ·细胞周期与肿瘤发生 | 第26页 |
| ·细胞凋亡概述 | 第26-27页 |
| ·细胞凋亡的信号转导通路 | 第27-29页 |
| ·课题相关细胞信号通路 | 第29-33页 |
| ·PI3K/Akt信号转导通路 | 第29-31页 |
| ·MAPK信号转导通路 | 第31页 |
| ·Wnt与p53信号转导通路 | 第31-33页 |
| ·本文主要研究内容与思路 | 第33-34页 |
| 2 TMC对肿瘤细胞的生长抑制作用与抑制PP1的关系 | 第34-56页 |
| ·引言 | 第34-35页 |
| ·实验材料与设备 | 第35-37页 |
| ·实验材料 | 第35页 |
| ·实验试剂 | 第35-36页 |
| ·实验设备 | 第36页 |
| ·试剂配制 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-44页 |
| ·质粒提取 | 第37-38页 |
| ·DNA片段纯化回收 | 第38页 |
| ·感受态细胞制备及转化 | 第38-39页 |
| ·磷酸酶PP1原核表达载体构建 | 第39-40页 |
| ·重组PP1菌株的诱导表达 | 第40-41页 |
| ·重组PP1的分离纯化 | 第41页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第41-42页 |
| ·Western Blotting检测方法 | 第42页 |
| ·蛋白磷酸酶PP1活性测定 | 第42-43页 |
| ·MTT与MTS法检测细胞增殖 | 第43-44页 |
| ·ELISA法检测细胞IL-2表达量 | 第44页 |
| ·统计学分析 | 第44页 |
| ·实验结果 | 第44-54页 |
| ·磷酸酶PP1原核表达载体构建 | 第44-46页 |
| ·重组PP1的分离纯化 | 第46-48页 |
| ·TMC及其衍生物的结构 | 第48-49页 |
| ·TMC及其衍生物的PP1抑制活性 | 第49-50页 |
| ·TMC及其衍生物的肿瘤细胞生长抑制活性 | 第50页 |
| ·TMC及其衍生物的免疫抑制活性 | 第50-52页 |
| ·TMC的肿瘤细胞生长抑制活性与细胞内PP1活性的关联 | 第52-54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 3 TMC对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响 | 第56-77页 |
| ·引言 | 第56页 |
| ·实验材料与设备 | 第56-58页 |
| ·实验材料 | 第56-57页 |
| ·实验试剂 | 第57页 |
| ·实验设备 | 第57-58页 |
| ·试剂配制 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-64页 |
| ·细胞增殖检测 | 第58-59页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第59页 |
| ·细胞划痕实验 | 第59-60页 |
| ·Transwell细胞迁移检测 | 第60页 |
| ·Transwell细胞侵袭检测 | 第60-61页 |
| ·Western blotting检测信号蛋白表达 | 第61-63页 |
| ·Caspase抑制剂阻断凋亡实验 | 第63页 |
| ·统计学分析 | 第63-64页 |
| ·实验结果 | 第64-75页 |
| ·TMC对不同肿瘤细胞增殖的抑制作用 | 第64-65页 |
| ·TMC对乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭的影响 | 第65-67页 |
| ·TMC诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡 | 第67-68页 |
| ·TMC对细胞周期相关蛋白表达的影响 | 第68页 |
| ·TMC对Bcl-2家族蛋白表达的影响 | 第68-69页 |
| ·TMC对caspase级联蛋白表达的影响 | 第69-70页 |
| ·TMC抑制MCF-7细胞生长依赖caspase激活 | 第70-71页 |
| ·TMC对耐药细胞MCF-7/ADR细胞增殖和凋亡的影响 | 第71-73页 |
| ·TMC对Bcl-2和cytochrome-c蛋白表达的影响 | 第73-74页 |
| ·TMC对MCF-7/ADR细胞caspase活性的影响 | 第74-75页 |
| ·讨论 | 第75-76页 |
| ·小结 | 第76-77页 |
| 4 TMC对MCF-7细胞凋亡上游信号通路的影响 | 第77-95页 |
| ·引言 | 第77页 |
| ·实验材料与设备 | 第77-79页 |
| ·实验材料 | 第77-78页 |
| ·实验试剂 | 第78页 |
| ·实验设备 | 第78-79页 |
| ·试剂配制 | 第79页 |
| ·实验方法 | 第79-84页 |
| ·信号蛋白表达量及磷酸化检测 | 第79页 |
| ·转录因子转录活性检测 | 第79-80页 |
| ·Akt真核表达质粒转染 | 第80-81页 |
| ·蛋白磷酸酶PP1基因沉默 | 第81-82页 |
| ·TMC作用靶点生物信息学预测 | 第82-83页 |
| ·二氢叶酸还原酶活性测定 | 第83页 |
| ·统计学分析 | 第83-84页 |
| ·实验结果 | 第84-92页 |
| ·TMC对MAPK信号通路的影响 | 第84-85页 |
| ·TMC对Wnt和p53信号通路的影响 | 第85-87页 |
| ·TMC对Akt信号通路的影响 | 第87-89页 |
| ·Akt激活质粒过表达对TMC活性的影响 | 第89-90页 |
| ·PP1基因沉默对Akt磷酸化的影响 | 第90页 |
| ·TMC作用靶点的生物信息学分析 | 第90-91页 |
| ·生物信息预测靶点的实验验证 | 第91-92页 |
| ·讨论 | 第92-94页 |
| ·小结 | 第94-95页 |
| 5 TMC与Leptomycin B联用对MCF-7细胞增殖的协同抑制作用 | 第95-109页 |
| ·引言 | 第95-96页 |
| ·实验材料与设备 | 第96-97页 |
| ·实验材料 | 第96页 |
| ·实验试剂 | 第96页 |
| ·实验设备 | 第96-97页 |
| ·试剂配制 | 第97页 |
| ·实验方法 | 第97-101页 |
| ·细胞总RNA提取 | 第97页 |
| ·FKHR真核表达载体构建 | 第97-99页 |
| ·联合用药协同效应测定方法 | 第99-100页 |
| ·Western blotting检测信号蛋白表达 | 第100页 |
| ·GFP-FKHR真核表达质粒转染 | 第100-101页 |
| ·统计学分析 | 第101页 |
| ·实验结果 | 第101-107页 |
| ·TMC与LMB联用抑制MCF-7细胞增殖的协同效应 | 第101-102页 |
| ·TMC与LMB联用对Bcl-2家族蛋白表达影响 | 第102-103页 |
| ·TMC与LMB联用对Akt和FKHR磷酸化的影响 | 第103-104页 |
| ·FKHR-GFP真核表达质粒构建 | 第104-106页 |
| ·TMC与LMB联用对FKHR细胞核定位的协同作用 | 第106-107页 |
| ·讨论 | 第107-108页 |
| ·小结 | 第108-109页 |
| 6 结论与展望 | 第109-111页 |
| ·结论 | 第109-110页 |
| ·创新点摘要 | 第110页 |
| ·展望 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-120页 |
| 附录 缩略词表 | 第120-121页 |
| 攻读博士学位期间发表学术论文情况 | 第121-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
| 作者简介 | 第123-124页 |
