| 致谢 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-32页 |
| ·鱼类原始生殖细胞研究进展 | 第13-24页 |
| ·鱼类 PGCs 的形成 | 第14-15页 |
| ·鱼类 PGCs 的迁移 | 第15-18页 |
| ·鱼类 PGCs 在性别分化中的作用 | 第18-20页 |
| ·鱼类 PGCs 的可视化标记 | 第20-21页 |
| ·鱼类 PGCs 的应用 | 第21-24页 |
| ·鱼类 vasa 基因研究进展 | 第24-28页 |
| ·vasa 基因的结构 | 第25页 |
| ·vasa 基因在鱼类胚胎发育中的定位和功能 | 第25-26页 |
| ·vasa 基因在鱼类配子发生过程中的表达和功能 | 第26-27页 |
| ·vasa 基因可能参与鱼类性别分化 | 第27-28页 |
| ·dnd 基因研究进展 | 第28-30页 |
| ·本研究的意义及目的 | 第30-32页 |
| 第二章 vasa/dnd 在大菱鲆 PGCs 发生迁移及配子形成过程表达模式研究 | 第32-64页 |
| ·研究背景 | 第32-33页 |
| ·材料与方法 | 第33-41页 |
| ·实验材料和取样 | 第33页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第33-34页 |
| ·大菱鲆 vasa/dnd 基因克隆 | 第34-37页 |
| ·RNA 提取和 cDNA 第一条链合成 | 第34页 |
| ·vasa/dnd 部分片段获得 | 第34-35页 |
| ·RACE-PCR 获得全长 vasa/dnd cDNA 序列 | 第35-37页 |
| ·序列分析及进化树构建 | 第37页 |
| ·半定量 RT-PCR 研究 vasa/dnd mRNA 不同组织及胚胎发育时期的表达 | 第37-38页 |
| ·原位杂交研究 vasa/dnd mRNA 在性腺和胚胎发育过程中的定位 | 第38-41页 |
| ·vasa/dnd RNA 探针合成 | 第38-39页 |
| ·性腺切片原位杂交 | 第39-40页 |
| ·胚胎整体原位杂交 | 第40-41页 |
| ·结果 | 第41-57页 |
| ·大菱鲆 vasa/dnd 基因克隆及序列分析 | 第41-47页 |
| ·vasa 基因克隆及序列分析 | 第41-44页 |
| ·dnd 基因克隆及序列分析 | 第44-47页 |
| ·大菱鲆 vasa/dnd 基因成体不同组织表达分析 | 第47-51页 |
| ·vasa 基因在成体组织表达分析 | 第47-49页 |
| ·dnd 基因在成体组织表达分析 | 第49-51页 |
| ·大菱鲆 vasa/dnd 在胚胎发育过程中的表达水平和定位 | 第51-57页 |
| ·vasa 基因在胚胎发育过程中的表达 | 第51-55页 |
| ·dnd 基因在胚胎发育过程中的表达 | 第55-57页 |
| ·讨论 | 第57-64页 |
| ·大菱鲆 SmVasa 和 SmDnd 序列高度保守 | 第57-58页 |
| ·大菱鲆 vasa/dnd 在生殖系细胞中特异表达 | 第58-59页 |
| ·大菱鲆 vasa/dnd 可能参与配子发生过程 | 第59-60页 |
| ·大菱鲆 PGCs 的起源和迁移模式 | 第60-61页 |
| ·鱼类 vasa 定位方式可能存在三种模式 | 第61-64页 |
| 第三章 vasa/dnd 在大菱鲆雌雄性腺发育过程中的差异表达研究 | 第64-74页 |
| ·研究背景 | 第64-65页 |
| ·材料和方法 | 第65-68页 |
| ·实验材料和取样 | 第65页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第65页 |
| ·石蜡组织切片 | 第65-66页 |
| ·荧光定量 PCR | 第66-68页 |
| ·结果 | 第68-72页 |
| ·大菱鲆雌雄性腺发育组织学研究 | 第68-70页 |
| ·大菱鲆雌雄性腺发育过程中 vasa/dnd 差异表达分析 | 第70-72页 |
| ·讨论 | 第72-74页 |
| 第四章 真鲷vasa基因在生殖细胞中的表达定位及其转录调控序列对生殖细胞标记功能的研究 | 第74-99页 |
| ·研究背景 | 第74-75页 |
| ·真鲷 vasa 在配子形成及胚胎发育过程中的表达定位研究 | 第75-80页 |
| ·材料与方法 | 第75-76页 |
| ·实验材料和取样 | 第75页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第75页 |
| ·组织切片 | 第75-76页 |
| ·真鲷 vasa RNA 探针合成 | 第76页 |
| ·原位杂交 | 第76页 |
| ·实验结果 | 第76-79页 |
| ·真鲷 vasa 基因在性腺中的表达定位 | 第76-78页 |
| ·真鲷 vasa 基因在胚胎发育过程中的定位 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-80页 |
| ·真鲷 vasa 转录调控序列对生殖细胞标记功能的研究 | 第80-99页 |
| ·材料与方法 | 第80-85页 |
| ·实验材料 | 第80页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第80-81页 |
| ·真鲷 vasa 转录调控序列克隆及分析 | 第81-82页 |
| ·GFP-Pmvas3’UTR mRNA 构建 | 第82-83页 |
| ·pPmvasGFP 转基因表达载体构建 | 第83-84页 |
| ·显微注射 | 第84页 |
| ·转基因青鳉筛选 | 第84页 |
| ·冰冻切片及观察 | 第84-85页 |
| ·结果 | 第85-95页 |
| ·真鲷 vasa 转录调控序列克隆 | 第85-86页 |
| ·真鲷 vasa 5’侧翼生物信息学分析 | 第86-88页 |
| ·GFP-Pmvas3’UTR，RFP-Olnos33’UTR mRNA 及 pPmvasGFP质粒构建 | 第88页 |
| ·GFP-Pmvas3’UTR mRNA 瞬时标记青鳉 PGCs | 第88-90页 |
| ·生殖细胞稳定表达 GFP 的转基因青鳉家系的建立 | 第90-91页 |
| ·pPmvasGFP 转基因青鳉生殖系 GFP 表达模式 | 第91-95页 |
| ·讨论 | 第95-99页 |
| ·真鲷 vasa 转录调控序列克隆及分析 | 第95-96页 |
| ·真鲷 vasa 3’UTR 能够瞬时标记 PGCs | 第96-97页 |
| ·pPmvasGFP 转基因质粒能够稳定标记生殖细胞 | 第97-99页 |
| 第五章 结论与展望 | 第99-102页 |
| ·研究结论 | 第99-100页 |
| ·展望 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-114页 |
| 作者简历 | 第114-115页 |
| 博士期间发表和完成的论文 | 第115-116页 |
