| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-20页 |
| ·组蛋白质乙酰化修饰概述 | 第11-12页 |
| ·非组蛋白乙酰化修饰概述 | 第12-14页 |
| ·蛋白质去乙酰化酶概述 | 第14-18页 |
| ·真核生物去乙酰化酶概述 | 第15-18页 |
| ·原核生物去乙酰化酶概述 | 第18页 |
| ·本章小结 | 第18-19页 |
| 本课题研究目标 | 第19-20页 |
| 第二章 基于大肠杆菌全蛋白芯片“CLIP-CHIP”技术的建立 | 第20-29页 |
| ·芯片的制备 | 第20-23页 |
| ·材料和方法 | 第20页 |
| ·乙酰化底物蛋白的表达和纯化 | 第20-21页 |
| ·蛋白芯片和底物芯片的制备 | 第21-23页 |
| ·CLIP-CHIP 试验 | 第23-25页 |
| ·“Clip-Chip”技术原理概述 | 第23-24页 |
| ·材料和方法 | 第24页 |
| ·“Clip-Chip”试验流程 | 第24-25页 |
| ·试验结果 | 第25-28页 |
| ·乙酰化底物蛋白表达纯化结果 | 第25-26页 |
| ·“Clip-Chip”试验结果及分析 | 第26-28页 |
| ·本章小结 | 第28-29页 |
| 第三章 体外验证 YCGC 的去乙酰化酶活力 | 第29-39页 |
| ·实验材料 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-33页 |
| ·新型去乙酰化酶的表达及其纯化 | 第30页 |
| ·体外验证提取的去乙酰化酶活性 | 第30-31页 |
| ·YcgC 对底物蛋白 YcdC 酶活性的检测以及酶活动力曲线的测定 | 第31-32页 |
| ·乙酰化蛋白 YcdC 反应前后的质谱鉴定 | 第32-33页 |
| ·实验结果及其分析 | 第33-38页 |
| ·去乙酰化酶 CobB 和 YcgC 蛋白纯化结果 | 第33-34页 |
| ·体外 western 验证 YcgC 去乙酰化能力结果 | 第34-35页 |
| ·YcgC 去乙酰化酶活动力曲线的绘制 | 第35页 |
| ·测定 YcgC 以 YcdC 为底物时的去乙酰化位点 | 第35-38页 |
| ·本章小结 | 第38-39页 |
| 第四章 体内验证 YCGC 的去乙酰化酶活力 | 第39-55页 |
| ·本章概述 | 第39-40页 |
| ·实验材料和仪器 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-48页 |
| ·目的基因的 PCR 扩增及处理 | 第40-41页 |
| ·测定 E.coli 全蛋白的乙酰化 | 第41-42页 |
| ·设计合成 C 末端带有 3X FLAG 标签的 YcdC 全基因序列 | 第42-43页 |
| ·将合成的目的基因敲入到宿主菌中 | 第43-44页 |
| ·用 3X FLAG 抗体进行敲入验证 | 第44-46页 |
| ·YcgC 质粒转入 W3100（YcdC_3X FLAG）菌株 | 第46页 |
| ·体内验证 YcgC 对底物蛋白 YcdC 的去乙酰化反应 | 第46-48页 |
| ·结果及分析 | 第48-53页 |
| ·YcdC_3X FLAG 基因的 PCR 结果 | 第48-49页 |
| ·E.coli 全蛋白的乙酰化结果 | 第49-50页 |
| ·基因水平验证 YcdC_3X FLAG 片段敲入结果 | 第50页 |
| ·蛋白水平验证 YcdC_3X FLAG 片段敲入结果 | 第50-51页 |
| ·体内验证 YcgC 对底物蛋白 YcdC 的去乙酰化反应 | 第51-53页 |
| ·本章小结 | 第53-55页 |
| 第五章 YCDC 控制的 GAD SYSTEM 基因的调节变化 | 第55-61页 |
| ·本章概述 | 第55页 |
| ·材料和方法 | 第55-56页 |
| ·REAL-TIME PCR 验证 YCDC 所调控基因的转录情况 | 第56-58页 |
| ·RNA 的提取与逆转录 | 第56页 |
| ·荧光定量 PCR 验证 Gad system 基因变化 | 第56-58页 |
| ·结果分析 | 第58-60页 |
| ·RNA 的提取结果 | 第58页 |
| ·YcdC 控制的 Gad System 基因转录变化结果 | 第58-60页 |
| ·本章小结 | 第60-61页 |
| 本研究的创新点及下一步工作计划 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 | 第70-71页 |
| 附录 Ⅰ 仪器信息 | 第71-72页 |
| 附录 Ⅱ 缓冲液信息 | 第72-75页 |
