| 致谢 | 第1-12页 |
| 摘要 | 第12-14页 |
| ABSTRACT | 第14-16页 |
| 1 前言 | 第16-22页 |
| ·酵母中蛋白酶A的研究进展 | 第16-20页 |
| ·酵母蛋白酶A的结构 | 第16页 |
| ·酵母蛋白酶A的生化特性 | 第16-17页 |
| ·蛋白酶A的分泌及加工修饰过程 | 第17-18页 |
| ·酵母蛋白酶A的生物学功能研究 | 第18-20页 |
| ·选题背景与研究思路 | 第20-22页 |
| 2 蛋白酶A敲除对酿酒酵母糖代谢关键酶活性的影响 | 第22-31页 |
| ·前言 | 第22-23页 |
| ·材料与方法 | 第23-26页 |
| ·菌株 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第23页 |
| ·细胞生长和降糖实验 | 第23-24页 |
| ·恒化培养实验 | 第24页 |
| ·无细胞酶液的制备 | 第24页 |
| ·关键酶酶活的测定 | 第24-26页 |
| ·结果与讨论 | 第26-30页 |
| ·正常培养条件下原始菌与突变酿酒酵母细胞的生长和降糖情况 | 第26-27页 |
| ·恒化培养条件下酵母菌体的生长和降糖情况 | 第27-28页 |
| ·原始菌与蛋白酶A敲除的突变酵母EMP途径三个关键酶活的比较 | 第28-29页 |
| ·单倍体酿酒酵母细胞TCA途径三个关键酶活的比较 | 第29-30页 |
| ·本章小结 | 第30-31页 |
| 3 蛋白酶A敲除对酿酒酵母糖代谢中关键酶基因表达的影响 | 第31-38页 |
| ·前言 | 第31页 |
| ·材料与方法 | 第31-34页 |
| ·酵母菌株 | 第31-32页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第32页 |
| ·RNA抽提 | 第32页 |
| ·反转录 | 第32-33页 |
| ·荧光定量PCR检测 | 第33-34页 |
| ·结果与讨论 | 第34-37页 |
| ·本章小结 | 第37-38页 |
| 4 蛋白酶A敲除对酿酒酵母蛋白表达及糖代谢的调控影响 | 第38-49页 |
| ·前言 | 第38页 |
| ·材料与方法 | 第38-41页 |
| ·菌株 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38-39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·主要仪器设备 | 第39页 |
| ·菌体样品制备 | 第39-40页 |
| ·蛋白的提取和蛋白浓度的测定 | 第40页 |
| ·双向电泳 | 第40页 |
| ·蛋白鉴定 | 第40-41页 |
| ·结果与讨论 | 第41-47页 |
| ·蛋白质双向电泳结果与分析 | 第41-43页 |
| ·差异蛋白点GO分析 | 第43-45页 |
| ·差异蛋白点KEGG Pathway分析 | 第45-46页 |
| ·糖代谢途径三个重要酶的基因在转录水平上的表达量鉴定和比较 | 第46-47页 |
| ·本章小结 | 第47-49页 |
| 5 低氮胁迫下蛋白酶A敲除对酿酒酵母糖代谢关键酶的影响 | 第49-58页 |
| ·前言 | 第49页 |
| ·材料与方法 | 第49-51页 |
| ·菌株 | 第49页 |
| ·培养基 | 第49-50页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第50页 |
| ·细胞生长和降糖规律试验 | 第50页 |
| ·无细胞酶液的制备 | 第50页 |
| ·胞内外蛋白浓度的测定 | 第50-51页 |
| ·低氮条件下酿酒酵母糖代谢中关键酶比活的测定 | 第51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-57页 |
| ·低氮胁迫下对照酵母与蛋白酶A敲除的突变菌生长和残糖浓度的比较 | 第51-52页 |
| ·低氮胁迫下发酵液中粗蛋白含量比较 | 第52-53页 |
| ·低氮胁迫条件下胞内蛋白含量比较 | 第53-54页 |
| ·低氮胁迫条件下糖代谢中关键酶比活的测定结果 | 第54-57页 |
| ·本章小结 | 第57-58页 |
| 6 蛋白酶A敲除对酿酒酵母细胞抗氧化性能的影响 | 第58-68页 |
| ·前言 | 第58页 |
| ·材料与方法 | 第58-61页 |
| ·菌株 | 第58页 |
| ·培养基 | 第58-59页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第59页 |
| ·不同过氧化氢浓度下酿酒酵母生长情况比较 | 第59页 |
| ·无细胞酶液的制备 | 第59-60页 |
| ·超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定 | 第60页 |
| ·过氧化氢酶(CAT)活性的测定 | 第60页 |
| ·胞内蛋白浓度的测定 | 第60-61页 |
| ·海藻糖浓度的测定 | 第61页 |
| ·结果与讨论 | 第61-67页 |
| ·不同浓度过氧化氢处理下PrA敲除酿酒酵母与对照菌的细胞生长比较 | 第61-63页 |
| ·氧化胁迫下蛋白酶A敲除的酵母细胞SOD活性分析 | 第63-64页 |
| ·氧化胁迫下蛋白酶A敲除酵母细胞的过氧化氢酶活性分析 | 第64页 |
| ·氧化胁迫下蛋白酶A敲除的酿酒酵母胞内蛋白浓度变化 | 第64-65页 |
| ·氧化胁迫下蛋白酶A敲除的酵母细胞胞内海藻糖分析 | 第65-67页 |
| ·本章小结 | 第67-68页 |
| 7 蛋白酶A敲除对酿酒酵母细胞抗辐射性的影响 | 第68-77页 |
| ·前言 | 第68页 |
| ·材料与方法 | 第68-71页 |
| ·菌株 | 第68-69页 |
| ·培养基 | 第69页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第69页 |
| ·不同辐射剂量下酵母生长情况比较 | 第69页 |
| ·无细胞酶液的制备 | 第69-70页 |
| ·超氧化物歧化酶SOD活性的测定 | 第70页 |
| ·过氧化氢酶CAT活性的测定 | 第70页 |
| ·海藻糖浓度的测定 | 第70-71页 |
| ·胞内蛋白浓度的测定 | 第71页 |
| ·结果与讨论 | 第71-76页 |
| ·不同辐射剂量下酵母生长情况比较和分析 | 第71-72页 |
| ·辐射处理下超氧化物歧化酶活性检测结果 | 第72-73页 |
| ·过氧化氢酶CAT活性测定试验结果 | 第73-74页 |
| ·海藻糖浓度测定结果及其分析 | 第74-75页 |
| ·胞内蛋白浓度测定结果及其分析 | 第75-76页 |
| ·本章小结 | 第76-77页 |
| 8 总结与展望 | 第77-79页 |
| ·主要研究结论 | 第77-78页 |
| ·后续研究展望 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-88页 |
| 作者简历 | 第88页 |
| 研究生阶段取得的主要学术成果 | 第88-89页 |
| 附录表Ⅰ | 第89-101页 |
