| 致谢 | 第1-5页 |
| 目录 | 第5-9页 |
| 内容摘要 | 第9-10页 |
| Summery | 第10-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-19页 |
| ·纤维素资源 | 第12页 |
| ·纤维素酶 | 第12-13页 |
| ·纤维素酶的组成 | 第12-13页 |
| ·纤维素酶的分子结构 | 第13页 |
| ·纤维素酶基因工程研究进展 | 第13-16页 |
| ·纤维素酶基因的克隆 | 第13-14页 |
| ·纤维素酶基因的原核表达 | 第14页 |
| ·纤维素酶基因的真核表达 | 第14-16页 |
| ·纤维素酶基因在酵母中的表达 | 第14-15页 |
| ·纤维素酶基因在真菌及植物中表达 | 第15-16页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第16-18页 |
| ·毕赤酵母表达系统的优越性 | 第16-17页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第17-18页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 纤维素酶 CBHⅠ基因的克隆及鉴定 | 第19-32页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·仪器设备 | 第19页 |
| ·菌种与质粒 | 第19页 |
| ·酶与试剂 | 第19页 |
| ·培养基 | 第19页 |
| ·溶液配制 | 第19-20页 |
| ·方法和步骤 | 第20-24页 |
| ·康氏木霉（T.koningii）总 DNA 的提取 | 第20-21页 |
| ·纤维素酶 CBHⅠ基因的克隆 | 第21-24页 |
| ·PCR 引物设计 | 第21页 |
| ·PCR 扩增 | 第21页 |
| ·PCR 产物纯化回收 | 第21-22页 |
| ·PCR 产物与 PMD19-T 载体的连接 | 第22页 |
| ·连接产物的转化 | 第22页 |
| ·阳性转化子的鉴定 | 第22-24页 |
| ·结果与分析 | 第24-31页 |
| ·康氏木霉基因组的提取及 CBHⅠ基因的 PCR 扩增结果 | 第24页 |
| ·重组克隆的蓝白斑筛选 | 第24-25页 |
| ·重组克隆的鉴定 | 第25-26页 |
| ·克隆基因片段的序列分析 | 第26-31页 |
| ·讨论 | 第31-32页 |
| 第三章 纤维素酶 CBHⅠ基因真核表达载体的构建 | 第32-39页 |
| ·材料 | 第32-33页 |
| ·仪器设备 | 第32页 |
| ·菌种与质粒 | 第32页 |
| ·酶与试剂 | 第32页 |
| ·质粒 pGAPZαA 的物理图谱 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32-33页 |
| ·溶液配制 | 第33页 |
| ·方法和步骤 | 第33-36页 |
| ·CBHⅠ基因的回收 | 第33-34页 |
| ·真核表达载体 pGAPZαA 质粒的回收 | 第34-35页 |
| ·CBHⅠ基因和真核表达载体 pGAPZαA 质粒的连接 | 第35页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 DH5α | 第35页 |
| ·重组转化子的鉴定 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-38页 |
| ·重组克隆的抗生素筛选 | 第36-37页 |
| ·重组表达载体 pGAPZαA-CBHⅠ的鉴定 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| 第四章 纤维素酶 CBHⅠ基因电击转化毕赤酵母 | 第39-46页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·仪器与设备 | 第39页 |
| ·菌种与试剂 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39页 |
| ·溶液和配制 | 第39-40页 |
| ·方法和步骤 | 第40-44页 |
| ·重组质粒 pGAPZαA-CBHⅠ线性化 | 第40-41页 |
| ·毕赤酵母 X-33 感受态细胞的制备 | 第41页 |
| ·毕赤酵母的电击转化 | 第41-42页 |
| ·重组酵母菌的鉴定 | 第42-44页 |
| ·重组酵母 PCR 鉴定和测序鉴定 | 第42-43页 |
| ·SDS-PAGE 检测目的蛋白 | 第43-44页 |
| ·结果与分析 | 第44-45页 |
| ·重组酵母菌 PCR 检测结果 | 第44页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白电泳检测结果 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| 第五章 重组毕赤酵母产酶活性测定 | 第46-54页 |
| ·材料 | 第46-47页 |
| ·仪器与设备 | 第46页 |
| ·培养基 | 第46页 |
| ·溶液和配制 | 第46-47页 |
| ·方法和步骤 | 第47-49页 |
| ·重组酵母菌平皿活性检测 | 第47页 |
| ·酵母重组菌纤维素酶活性的测定 | 第47-48页 |
| ·粗酶液的制备 | 第47页 |
| ·纤维素酶活力测定 | 第47-48页 |
| ·纤维素酶最适反应条件的确定 | 第48-49页 |
| ·纤维素酶最适反应温度的测定 | 第48-49页 |
| ·纤维素酶最适反应 PH 的测定 | 第49页 |
| ·纤维素酶最适反应时间的测定 | 第49页 |
| ·结果与分析 | 第49-52页 |
| ·刚果红平板检测结果 | 第49页 |
| ·重组酵母菌纤维素酶活性测定结果 | 第49-50页 |
| ·纤维素酶最适反应条件的测定结果 | 第50-52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 总结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
