| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第1章 前言 | 第11-23页 |
| ·核苷类化合物的简介 | 第11页 |
| ·核苷类化合物的作用机理 | 第11-12页 |
| ·常见的核苷类药物 | 第12-14页 |
| ·具有抗病毒作用的核苷类药物 | 第12-13页 |
| ·具有抗肿瘤作用的核苷类药物 | 第13-14页 |
| ·核苷衍生物的传统化学合成法 | 第14页 |
| ·糖基改造 | 第14页 |
| ·碱基改造 | 第14页 |
| ·核苷类药物的生物转化法—酶合成法 | 第14-16页 |
| ·核苷磷酸化酶 | 第15页 |
| ·N-脱氧核糖转移酶 | 第15-16页 |
| ·N-脱氧核糖转移酶简介 | 第16-20页 |
| ·N-脱氧核糖转移酶性质 | 第16页 |
| ·N-脱氧核糖转移酶催化机理 | 第16-19页 |
| ·N-脱氧核糖转移酶在核苷类似物合成方面的应用 | 第19-20页 |
| ·研究意义及流程 | 第20-23页 |
| 第2章 N-脱氧核糖转移酶Ⅱ的克隆表达 | 第23-35页 |
| ·材料方法 | 第24-30页 |
| ·试剂与仪器 | 第24-28页 |
| ·化学药品 | 第24-25页 |
| ·生物制剂 | 第25页 |
| ·培养基材料和配方 | 第25-26页 |
| ·克隆用缓冲液 | 第26页 |
| ·质粒和菌种 | 第26-27页 |
| ·实验仪器 | 第27-28页 |
| ·方法 | 第28-30页 |
| ·大肠杆菌的培养 | 第28页 |
| ·菌种保藏 | 第28页 |
| ·大肠杆菌基因组提取 | 第28页 |
| ·DNA的琼脂糖电泳 | 第28-29页 |
| ·凝胶回收试剂盒回收凝胶 | 第29页 |
| ·高效感受态细胞制备试剂盒制备感受态细胞 | 第29页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第29-30页 |
| ·碱裂解法制备质粒 | 第30页 |
| ·DNA的酶切 | 第30页 |
| ·DNA的连接 | 第30页 |
| ·结果与讨论 | 第30-33页 |
| ·PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·克隆载体的构建 | 第31-32页 |
| ·表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·小结 | 第33-35页 |
| 第3章 N-脱氧核糖转移酶Ⅱ的诱导表达与活性分析 | 第35-47页 |
| ·材料和方法 | 第35-40页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第35-38页 |
| ·化学试剂 | 第35-36页 |
| ·缓冲液 | 第36-37页 |
| ·SDS-PAGE所用试剂 | 第37页 |
| ·凝胶的配制 | 第37-38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-45页 |
| ·N-脱氧核糖转移酶的诱导表达 | 第40-41页 |
| ·IPTG浓度对蛋白表达的影响 | 第41-42页 |
| ·诱导时间和温度对蛋白表达的影响 | 第42页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第42-43页 |
| ·N-脱氧核糖转移酶Ⅱ活力的测定 | 第43页 |
| ·N-脱氧核糖转移酶Ⅱ的酶学性质研究 | 第43-45页 |
| ·N-脱氧核糖转移酶Ⅱ的温度稳定性研究 | 第43-44页 |
| ·温度对N-脱氧核糖转移酶Ⅱ相对活力的影响 | 第44-45页 |
| ·pH对N-脱氧核糖转移酶Ⅱ相对活力的影响 | 第45页 |
| ·小结 | 第45-47页 |
| 第4章 N-脱氧核糖转移酶Ⅱ的性质研究 | 第47-55页 |
| ·材料与方法 | 第47-48页 |
| ·试剂与仪器 | 第47页 |
| ·化学试剂 | 第47页 |
| ·生物试剂 | 第47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-48页 |
| ·转化率的测定 | 第47-48页 |
| ·结果与讨论 | 第48-53页 |
| ·温度对N-脱氧核糖转移酶Ⅱ转化率的影响 | 第48页 |
| ·pH对脱氧胞苷和脱氧腺苷转化率的影响 | 第48-49页 |
| ·反应时间对脱氧胞苷和脱氧腺苷转化率的影响 | 第49页 |
| ·底物浓度对脱氧胞苷和脱氧腺苷转化率的影响 | 第49-50页 |
| ·酶蛋白质量对脱氧胞苷和脱氧腺苷转化率的影响 | 第50-51页 |
| ·底物浓度比对脱氧胞苷和脱氧腺苷转化率的影响 | 第51页 |
| ·离子对脱氧胞苷和脱氧腺苷转化率的影响 | 第51-52页 |
| ·不同酶源对脱氧胞苷和脱氧腺苷转化率的影响 | 第52-53页 |
| ·小结 | 第53-55页 |
| 第5章 用N-脱氧核糖转移酶Ⅱ合成5-氮杂脱氧胞苷 | 第55-61页 |
| ·材料与方法 | 第55-56页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第55页 |
| ·化学试剂 | 第55页 |
| ·反应缓冲液 | 第55页 |
| ·主要仪器 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-56页 |
| ·不同反应条件对5-氮杂胞苷转化率的影响 | 第55页 |
| ·5-氮杂脱氧胞苷转化率的测定方法 | 第55-56页 |
| ·结果与讨论 | 第56-59页 |
| ·pH对5-氮杂脱氧胞苷转化率的影响 | 第56页 |
| ·反应时间对5-氮杂脱氧胞苷转化率的影响 | 第56-57页 |
| ·底物浓度对5-氮杂脱氧胞苷转化率的影响 | 第57页 |
| ·蛋白浓度对5-氮杂脱氧胞苷转化率的影响 | 第57-58页 |
| ·离子对5-氮杂脱氧胞苷转化率的影响 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第59-61页 |
| 第6章 结论与展望 | 第61-63页 |
| ·结论 | 第61页 |
| ·展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67页 |