| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-33页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的发现及基本特征 | 第13-15页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的流行病学及其危害 | 第15-18页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的流行病学 | 第15-18页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的危害 | 第18页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的毒力相关因子 | 第18-26页 |
| ·外毒素 | 第19-21页 |
| ·荚膜 | 第21-22页 |
| ·脂多糖 | 第22-23页 |
| ·外膜蛋白 | 第23页 |
| ·转铁结合蛋白 | 第23-24页 |
| ·酶类 | 第24页 |
| ·鞭毛和菌毛 | 第24-26页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌突变株构建方法的研究进展 | 第26-30页 |
| ·自然突变 | 第26页 |
| ·化学诱变 | 第26-27页 |
| ·分子生物学方法 | 第27-30页 |
| ·基因的甲基化 | 第30-33页 |
| ·DNA甲基化的主要形式 | 第30-31页 |
| ·甲基化对基因表达的影响 | 第31-32页 |
| ·甲基化调控基因表达的机制 | 第32-33页 |
| 第2章 胸膜肺炎放线杆菌flp基因缺失突变体构建及生物学特性研究 | 第33-55页 |
| ·目的和意义 | 第33-34页 |
| ·试验材料 | 第34-38页 |
| ·菌株和质粒 | 第34-35页 |
| ·主要药品和试剂配制 | 第35-36页 |
| ·主要培养基和抗生素 | 第36-37页 |
| ·寡核甘酸引物 | 第37-38页 |
| ·试验动物 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-45页 |
| ·细菌活化 | 第38-39页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第39页 |
| ·细菌RNA的提取 | 第39页 |
| ·反转录PCR | 第39-40页 |
| ·PCR扩增 | 第40页 |
| ·PCR或酶切产物的回收与纯化 | 第40-41页 |
| ·质粒DNA的连接 | 第41页 |
| ·质粒的小量制备 | 第41页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第41页 |
| ·连接产物及质粒的转化 | 第41-42页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第42页 |
| ·胸膜肺炎电转感受态的制备及电转化 | 第42页 |
| ·重组自杀性质粒pEMOC2-flpLR的构建 | 第42-43页 |
| ·接合转移与胸膜肺炎放线杆菌flp基因缺失株的筛选 | 第43-44页 |
| ·溶血性试验 | 第44页 |
| ·生长特性试验 | 第44页 |
| ·动物试验 | 第44-45页 |
| ·透射电镜对细菌表型观察 | 第45页 |
| ·结果与分析 | 第45-53页 |
| ·重组质粒pEMOC2-flpLR的构建 | 第45-47页 |
| ·重组质粒pEMOC2-flpLR导入APP及缺失菌株筛选 | 第47-48页 |
| ·突变株的鉴定以及缺失对操纵子的影响 | 第48-50页 |
| ·突变株的溶血性试验 | 第50-51页 |
| ·突变株生长特性试验 | 第51页 |
| ·动物试验 | 第51-52页 |
| ·电镜观察结果 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| ·重组质粒构建方法的选择 | 第53页 |
| ·缺失突变株形态毒力的变化 | 第53-54页 |
| ·结论 | 第54-55页 |
| 第3章 胸膜肺炎放线杆菌dam基因过表达菌株的研究 | 第55-67页 |
| ·目的及意义 | 第55页 |
| ·材料 | 第55-58页 |
| ·菌株和质粒 | 第55-56页 |
| ·寡核甘酸引物 | 第56-57页 |
| ·主要试剂 | 第57页 |
| ·培养基和抗生素 | 第57-58页 |
| ·实验方法 | 第58-61页 |
| ·基因的克隆 | 第58页 |
| ·重组质粒pJN105-dam的构建 | 第58-59页 |
| ·重组质粒pJN105-dam中dam基因活性鉴定 | 第59-60页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的电转化 | 第60页 |
| ·过表达菌株的溶血性试验 | 第60页 |
| ·生长特性试验 | 第60页 |
| ·半数致死量试验 | 第60页 |
| ·荧光定量对过表达菌株的毒素表达检测 | 第60-61页 |
| ·结果与分析 | 第61-66页 |
| ·pJN105-dam穿梭质粒的构建 | 第61-62页 |
| ·重组质粒中dam基因表达活性的检测 | 第62-63页 |
| ·过表达菌株溶血性试验 | 第63-64页 |
| ·过表达菌株的生长特定试验 | 第64页 |
| ·过表达菌株的毒力试验(LD50) | 第64-65页 |
| ·荧光定量检测毒素基因表达 | 第65-66页 |
| ·讨论 | 第66页 |
| ·质粒pJN105在胸膜肺炎放线杆菌中的稳定性 | 第66页 |
| ·细菌生长特性的减慢的影响 | 第66页 |
| ·结论 | 第66-67页 |
| 第4章 膜肺炎放线杆菌STM突变体库的构建 | 第67-73页 |
| ·目的及意义 | 第67页 |
| ·材料 | 第67-69页 |
| ·菌株和质粒 | 第67-68页 |
| ·培养基、抗生素及其他试剂的配制 | 第68页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第68-69页 |
| ·方法 | 第69页 |
| ·Mating法筛选突变体 | 第69页 |
| ·突变体的鉴定 | 第69页 |
| ·结果与分析 | 第69-71页 |
| ·突变体的筛选鉴定 | 第69-70页 |
| ·部分突变体库的建立 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-72页 |
| ·Mating法确定 | 第71页 |
| ·关于筛选过程中抗生素浓度的确定 | 第71-72页 |
| ·结论 | 第72-73页 |
| 小结 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
