一种编码拟南芥钙调素结合蛋白基因的载体构建及其初步表达
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 1.前言 | 第8-19页 |
| ·简述 | 第8-12页 |
| ·Ca~(2+)/CaM的研究概况 | 第8-9页 |
| ·CaMBP研究进展 | 第9-10页 |
| ·CaMBD研究进展 | 第10-12页 |
| ·PET原核表达系统 | 第12-19页 |
| ·简介 | 第12-13页 |
| ·本实验所用载体的相关介绍 | 第13-19页 |
| 2.实验材料和试剂 | 第19-23页 |
| ·实验材料 | 第19-23页 |
| ·菌株和质粒 | 第19页 |
| ·At5g62390的cDNA | 第19页 |
| ·化学试剂及抗生素 | 第19页 |
| ·限制性内切酶以及其他工具酶 | 第19-20页 |
| ·培养基 | 第20页 |
| ·常用缓冲液 | 第20-23页 |
| 3.实验策略、步骤 | 第23-29页 |
| ·不同长度cDNA的获得 | 第23-24页 |
| ·引物设计 | 第23页 |
| ·PCR反应 | 第23-24页 |
| ·酶切连接和鉴定 | 第24-25页 |
| ·对PCR产物的双酶切 | 第24页 |
| ·连接反应 | 第24-25页 |
| ·对CAM蛋白的诱导表达 | 第25-26页 |
| ·pETCaM_2的诱导表达 | 第25页 |
| ·SDS-PAGE分析表达结果 | 第25页 |
| ·钙调素的纯化 | 第25-26页 |
| ·生物素标记CaM | 第26页 |
| ·对重组PET-At5g的诱导表达 | 第26-28页 |
| ·对空载体pET32—a的诱导 | 第26页 |
| ·对重组载体pET-At5g的表达情况 | 第26页 |
| ·Ni-NTA亲和层析柱的制备 | 第26-27页 |
| ·亲和层析柱的再生 | 第27-28页 |
| ·CaM和At5g62390表达蛋白的结合实验 | 第28-29页 |
| ·电泳和转膜 | 第28页 |
| ·结合实验 | 第28-29页 |
| 4.实验结果 | 第29-33页 |
| ·不同的片段的cDNA的获得 | 第29页 |
| ·连接后得到的重组载体 | 第29-30页 |
| ·对重组载体的鉴定 | 第30-31页 |
| ·CAM2的获得 | 第31页 |
| ·生物素标记的CAM | 第31-32页 |
| ·对目的蛋白诱导表达条件的探索 | 第32-33页 |
| 5.讨论、对策及下一步实验安排 | 第33-35页 |
| ·载体构建方面 | 第33页 |
| ·PCR引物设计 | 第33页 |
| ·载体构建 | 第33页 |
| ·蛋白表达分析 | 第33页 |
| ·下一步的实验 | 第33-35页 |
| ·引物设计思路 | 第33-34页 |
| ·引物设计结果 | 第34页 |
| ·后续实验 | 第34-35页 |
| 参考文献 | 第35-37页 |
| 在校期间发表的论文、科研成果 | 第37-38页 |
| 致谢 | 第38页 |
