| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-9页 |
| 缩略语表 | 第9-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-42页 |
| ·eIF2α激酶家族 | 第15-23页 |
| ·eIF2α激酶的作用机制 | 第15-17页 |
| ·eIF2α激酶的结构特征 | 第17-18页 |
| ·eIF2α激酶的调节 | 第18-20页 |
| ·可能存在的其它eIF2α激酶 | 第20-21页 |
| ·eIF2α激酶的抑制子 | 第21-22页 |
| ·eIF2α激酶的其它作用 | 第22-23页 |
| ·HRI 基因的研究进展 | 第23-27页 |
| ·HRI 的结构特点 | 第23-24页 |
| ·HRI 的调节 | 第24-25页 |
| ·血红素对HRI 的调节 | 第24页 |
| ·热休克蛋白对HRI 的调节 | 第24-25页 |
| ·HRI 的组织分布 | 第25-26页 |
| ·HRI 的功能 | 第26-27页 |
| ·PKR 基因的研究进展 | 第27-39页 |
| ·PKR 的结构特点 | 第27-33页 |
| ·PKR 的N端 | 第27-31页 |
| ·PKR 的C 端 | 第31页 |
| ·中心区－磷酸化区域 | 第31页 |
| ·PKR 的启动子 | 第31-33页 |
| ·PKR 的合成与降解 | 第33-34页 |
| ·PKR 的功能 | 第34-39页 |
| ·PKR 的抗病毒功能 | 第36页 |
| ·PKR 能抑制肿瘤 | 第36-37页 |
| ·PKR 调节细胞增殖和分化 | 第37页 |
| ·PKR 在细胞凋亡中的作用 | 第37-38页 |
| ·PKR 在信号转导中的作用 | 第38页 |
| ·PKR 在转录调控中的作用 | 第38-39页 |
| ·鱼类eIF2α激酶 | 第39-40页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第40-42页 |
| 第二章 材料和方法 | 第42-68页 |
| ·实验材料 | 第42页 |
| ·牙鲆 | 第42页 |
| ·细胞和病毒 | 第42页 |
| ·主要仪器设备 | 第42-44页 |
| ·试剂 | 第44-48页 |
| ·试剂盒 | 第44页 |
| ·主要试剂 | 第44-46页 |
| ·生化与分子生物学试剂 | 第44-45页 |
| ·细胞培养常用试剂 | 第45-46页 |
| ·载体和菌株 | 第46-47页 |
| ·引物 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-68页 |
| ·细胞培养 | 第48-50页 |
| ·细胞培养及传代 | 第48-49页 |
| ·细胞株的保藏 | 第49页 |
| ·冻存细胞的复苏 | 第49-50页 |
| ·病毒增殖、纯化和紫外灭活 | 第50-51页 |
| ·病毒的增殖 | 第50页 |
| ·病毒的纯化 | 第50-51页 |
| ·紫外灭活病毒 | 第51页 |
| ·SMART cDNA 的合成 | 第51-54页 |
| ·病毒诱导的FEC 细胞的制备 | 第51页 |
| ·病毒诱导和对照FEC 细胞总RNA 的提取 | 第51-52页 |
| ·SMART cDNA 的合成 | 第52-54页 |
| ·RACE-PCR 克隆全长基因及序列分析 | 第54-56页 |
| ·RACE-PCR 克隆全长基因 | 第54-55页 |
| ·序列分析 | 第55-56页 |
| ·目的基因的原核表达，纯化及多克隆抗体的制备 | 第56-58页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第56页 |
| ·小量诱导筛选阳性克隆 | 第56页 |
| ·大量诱导 | 第56-57页 |
| ·蛋白的纯化 | 第57页 |
| ·多克隆抗体的制备和鉴定 | 第57-58页 |
| ·RT-PCR 分析 | 第58-60页 |
| ·RNA 的提取 | 第58页 |
| ·逆转录 | 第58-59页 |
| ·荧光定量 PCR | 第59-60页 |
| ·Western blot 分析基因的表达 | 第60-61页 |
| ·样品的制备 | 第60-61页 |
| ·Western blotting | 第61页 |
| ·目的基因的表达分析 | 第61-62页 |
| ·目的基因的组织特异性表达分析 | 第61-62页 |
| ·目的基因在FEC 细胞中的诱导表达分析 | 第62页 |
| ·目的基因在牙鲆鱼体中的诱导表达分析 | 第62页 |
| ·PolyI:C pull down 分析 | 第62-63页 |
| ·PolyI:C agarose beads 的制备 | 第62-63页 |
| ·PolyI:C pulldown | 第63页 |
| ·PKR 基因抑制翻译的功能分析 | 第63-67页 |
| ·点突变 | 第63-65页 |
| ·瞬时转染 | 第65-66页 |
| ·萤光素酶活性分析 | 第66-67页 |
| ·eIF2α的磷酸化分析 | 第67-68页 |
| ·FEC 细胞磷酸化蛋白的提取 | 第67页 |
| ·FEC细胞磷酸化蛋白的分析 | 第67-68页 |
| 第三章 结果与分析 | 第68-115页 |
| ·PoHRI 基因全长cDNA 的克隆及表达分析 | 第68-87页 |
| ·PoHRI 基因全长cDNA 的克隆 | 第68-69页 |
| ·PoHRI 基因的核苷酸序列和推测的氨基酸序列分析 | 第69-78页 |
| ·PoHRI 基因的原核表达和多克隆抗体的制备 | 第78-80页 |
| ·PoHRI 基因的组织表达分析 | 第80-82页 |
| ·PoHRI 基因在各种细胞压力诱导下的表达 | 第82-85页 |
| ·SMRV 诱导牙鲆鱼体中PoHRI 基因的表达分析 | 第85-87页 |
| ·PoPKR 基因全长cDNA的克隆、表达和功能分析 | 第87-115页 |
| ·PoPKR 基因全长cDNA 的克隆 | 第87-88页 |
| ·PoPKR 基因的核苷酸序列和推测的氨基酸序列分析 | 第88-96页 |
| ·PoPKR 基因的原核表达和多克隆抗体的制备 | 第96-98页 |
| ·病毒和Poly I:C 诱导FEC 细胞PoPKR 基因的表达 | 第98-100页 |
| ·SMRV 诱导牙鲆鱼体中PoPKR 基因的表达分析 | 第100-102页 |
| ·PoPKR 和PoHRI 受病毒诱导表达的差异 | 第102-105页 |
| ·PoPKR 蛋白N 端结构域的dsRNA 结合活性分析 | 第105-108页 |
| ·PoPKR 抑制翻译的功能分析 | 第108-113页 |
| ·eIF2α的磷酸化分析 | 第113-115页 |
| 第四章 讨论 | 第115-126页 |
| ·鱼类存在eIF2α激酶家族 | 第115-118页 |
| ·鱼类细胞在压力下具有eIF2α磷酸化现象 | 第115-116页 |
| ·牙鲆HRI 和PKR 基因是哺乳类的同源基因 | 第116-118页 |
| ·牙鲆HRI 和PKR 是两种遍在表达的激酶 | 第118-120页 |
| ·有关HRI的组织分布的争论 | 第118-119页 |
| ·牙鲆HRI 和PKR 存在本底表达的意义 | 第119-120页 |
| ·牙鲆eIF2α激酶功能保守性和特殊性 | 第120-123页 |
| ·PKR 的各结构域具有类似哺乳类PKR 的功能 | 第120-121页 |
| ·HRI 在多种压力下的功能 | 第121-122页 |
| ·PKR 和HRI 在抗病毒免疫中的可能角色 | 第122-123页 |
| ·鱼类eIF2α激酶的结构特殊性 | 第123-126页 |
| 总结 | 第126-127页 |
| 参考文献 | 第127-142页 |
| 附录 | 第142-143页 |
| 论文发表情况 | 第142-143页 |
| 致谢 | 第143页 |
