| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-24页 |
| 1． 1 生物催化与手性合成 | 第8-10页 |
| 1． 1． 1 水解酶(hydrolase) | 第8-9页 |
| 1． 1． 2 氧化还原酶(Oxidoreductases) | 第9页 |
| 1． 1． 3 转移酶(transferase) | 第9页 |
| 1． 1． 4 裂解酶(lyases) | 第9-10页 |
| 1． 2 微生物转化的手性合成 | 第10-15页 |
| 1． 2． 1 微生物转化手性药物合成的反应特点 | 第10-11页 |
| 1． 2． 2 应用于选择性手性催化的微生物 | 第11-12页 |
| 1． 2． 3 微生物转化方法 | 第12-14页 |
| 1． 2． 4 影响微生物转化的因素 | 第14-15页 |
| 1． 3 COBE和CHBE | 第15-16页 |
| 1． 3． 1 4-氯乙酰乙酸乙酯(COBE) | 第15-16页 |
| 1． 3． 2 4-氯-3-羟基丁酸乙酯(CHBE) | 第16页 |
| 1． 3． 3 R-(+)4-氯-3羟基丁酸乙酯(R-CHBE) | 第16页 |
| 1． 4 微生物转化生产R-CHBE | 第16-20页 |
| 1． 4． 1 微生物法还原羰基的原 | 第16-17页 |
| 1． 4． 2 微生物还原转化COBE得R-CHBE | 第17-20页 |
| 1． 5 辅酶再生 | 第20-23页 |
| 1． 5． 1 酶法再生 | 第20-21页 |
| 1． 5． 2 电化学法 | 第21-22页 |
| 1． 5． 3 光化学法 | 第22页 |
| 1． 5． 4 利用整个细胞 | 第22-23页 |
| 1． 6 本论文的研究目标 | 第23-24页 |
| 第二章 酵母菌的筛选与转化条件的初步考察 | 第24-31页 |
| 2． 1 引言 | 第24页 |
| 2． 2 材料和方法 | 第24-27页 |
| 2． 2． 1 试剂 | 第24页 |
| 2． 2． 2 菌种 | 第24页 |
| 2． 2． 3 培养基 | 第24页 |
| 2． 2． 4 培养方法 | 第24-25页 |
| 2． 2． 5 还原反应 | 第25页 |
| 2． 2． 6 分析方法 | 第25-27页 |
| 2． 2． 7 数据处理方法 | 第27页 |
| 2． 3 结果与讨论 | 第27-29页 |
| 2． 3． 1 菌种筛选 | 第27-28页 |
| 2． 3． 2 赭色掷孢酵母菌体生长曲线 | 第28页 |
| 2． 3． 3 转化时间对产物得率及e．e．值的影 | 第28-29页 |
| 2． 3． 4 底物COBE的浓度对细胞毒性以及产物得率的影响 | 第29页 |
| 2． 4 结论 | 第29-31页 |
| 第三章 醛基还原酶表达载体的构建 | 第31-39页 |
| 3． 1 引言 | 第31页 |
| 3． 2 材料和方法 | 第31-37页 |
| 3． 2． 1 质粒 | 第31-33页 |
| 3． 2． 2 菌利 | 第33-34页 |
| 3． 2． 3 培养基 | 第34页 |
| 3． 2． 4 工具酶和试剂盒 | 第34页 |
| 3． 2． 5 质粒抽提 | 第34页 |
| 3． 2． 6 感受态细胞的制备和质粒转化 | 第34-35页 |
| 3． 2． 7 DNA的检测 | 第35页 |
| 3． 2． 8 克隆载体和表达载体的构建 | 第35-37页 |
| 3． 3 结果与讨论 | 第37-39页 |
| 第四章 醛基还原酶表达菌株的筛选与培养条件的优化 | 第39-50页 |
| 4． 1 引言 | 第39页 |
| 4． 2 材料和方法 | 第39-42页 |
| 4． 2． 1 质粒和菌科 | 第39-40页 |
| 4． 2． 2 培养基 | 第40页 |
| 4． 2． 3 培养条件 | 第40页 |
| 4． 2． 4 酶活测定 | 第40-42页 |
| 4． 2． 5 羰基还原反应 | 第42页 |
| 4． 2． 6 分析方法 | 第42页 |
| 4． 3 醛基还原酶表达体系的筛选 | 第42页 |
| 4． 4 EcoliM15(pQE30-alr0307) 培养条件与醛基还原酶表达条件的优化 | 第42-47页 |
| 4． 4． 1 培养基的选择 | 第43-44页 |
| 4． 4． 2 摇瓶装液量 | 第44页 |
| 4． 4． 3 诱导时间 | 第44-46页 |
| 4． 4． 4 诱导剂IPTG的用量 | 第46页 |
| 4． 4． 5 诱导后的发酵时间 | 第46-47页 |
| 4． 5 辅酶和共底物对EcoliM15(pQE30-alr0307) 生产CHBE得率的影响 | 第47-48页 |
| 4． 6 小结 | 第48-50页 |
| 第五章 葡萄糖脱氢酶基因的表达 | 第50-54页 |
| 5． 1 引言 | 第50页 |
| 5． 2 材料和方法 | 第50-52页 |
| 5． 2． 1 质粒和菌种 | 第50页 |
| 5． 2． 2 培养基与培养条件 | 第50页 |
| 5． 2． 3 葡萄糖脱氢酶DNA的获得与PCR扩增 | 第50-51页 |
| 5． 2． 4 葡萄糖脱氢酶表达载体的构建 | 第51-52页 |
| 5． 2． 5 葡萄糖脱氢酶酶活力的测定 | 第52页 |
| 5． 3 葡萄糖脱氢酶的表达 | 第52页 |
| 5． 4 重组菌表达的葡萄糖脱氢酶与商业葡萄糖脱氢酶的NADPH再生能力比较 | 第52-54页 |
| 第六章 EcoliM15(pQE30-alr0307) 与EcoliM15(pQE30-gdh0310) 共同完成生物转化 | 第54-59页 |
| 6． 1 引言 | 第54页 |
| 6． 2 材料和方法 | 第54-55页 |
| 6． 2． 1 质粒和菌种 | 第54页 |
| 6． 2． 2 培养基和培养方法 | 第54-55页 |
| 6． 2． 3 分析方法 | 第55页 |
| 6． 3 不同底物浓度下，单菌转化(添加NADP~+和葡萄糖脱氢酶)和混菌转化的比较 | 第55-56页 |
| 6． 4 混菌转化体系中两种重组菌用量比例的考察 | 第56页 |
| 6． 5 混菌转化体系反应温度对(R)-CHBE得率的考察 | 第56-57页 |
| 6． 6 反应液中辅酶的测定 | 第57-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附录 | 第67-68页 |
