| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 1 前言 | 第10-34页 |
| ·对虾白斑杆状病毒及其功能基因研究 | 第10-21页 |
| ·对虾白斑杆状病毒研究概况 | 第10-16页 |
| ·白斑杆状病毒功能基因研究 | 第16-21页 |
| ·基因芯片技术 | 第21-34页 |
| ·基因芯片技术的基本概念 | 第22页 |
| ·历史发展 | 第22-24页 |
| ·技术关键以及存在的问题 | 第24-31页 |
| ·DNA微阵列的应用 | 第31-34页 |
| 2 对虾白斑杆状病毒人工感染增殖研究 | 第34-39页 |
| ·材料与方法 | 第34-35页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·病毒PCR模板的制备 | 第34页 |
| ·对虾及白斑杆状病毒的人工感染 | 第34-35页 |
| ·定量PCR测定病毒DNA含量 | 第35页 |
| ·对虾白斑杆状病毒人工感染早期的感染增殖观察 | 第35页 |
| ·对虾白斑病毒感染后不同个体的存活规律观察 | 第35页 |
| ·病毒在对虾体内最大累积量观察 | 第35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-39页 |
| ·定量PCR判定WSBV人工感染的增殖规律 | 第35-36页 |
| ·感染对虾体重大小与存活时间的关系 | 第36-37页 |
| ·死亡感染对虾的病毒最大累积量观察 | 第37-39页 |
| 3 对虾白斑杆状病毒全基因组微阵列分析 | 第39-62页 |
| ·材料与方法 | 第39-41页 |
| ·对虾白斑杆状病毒基因片段的扩增 | 第39页 |
| ·膜微阵列的制备 | 第39页 |
| ·感染病毒虾总RNA的提取与质量鉴定 | 第39-40页 |
| ·~(32)P-dATP逆转录标记cDNA | 第40页 |
| ·微阵列 杂交反应 | 第40-41页 |
| ·微阵列图像扫描与数据分析 | 第41页 |
| ·结果与讨论 | 第41-62页 |
| ·WSBV基因组膜DNA微阵列的制备 | 第41页 |
| ·RNA的提取 | 第41-42页 |
| ·微阵列图像扫描结果 | 第42-43页 |
| ·WSBV基因组微阵列数据分析结果 | 第43-62页 |
| 4 对虾白斑杆状病毒全基因组易变区研究 | 第62-68页 |
| ·材料与方法 | 第62-63页 |
| ·对虾白斑杆状病毒基因组长片段的PCR扩增 | 第62页 |
| ·对虾白斑病毒基因片段的纯化、克隆及序列测定 | 第62页 |
| ·对虾白斑病毒基因组DNA片段缺失和毒力关系的研究及电镜观察 | 第62-63页 |
| ·结果与讨论 | 第63-68页 |
| ·不同来源病毒易变区片段的长度 | 第63页 |
| ·病毒基因易变区序列的测定 | 第63-64页 |
| ·对虾白斑病毒基因组DNA片段缺失和毒力关系的研究 | 第64页 |
| ·病毒电镜观察 | 第64-68页 |
| 5 对虾白斑杆状病毒基因功能研究 | 第68-99页 |
| ·材料与方法 | 第68-86页 |
| ·WSBV功能基因的克隆与表达 | 第68页 |
| ·基因表达产物的纯化 | 第68-69页 |
| ·Glutathione Sepharose 4B亲合色谱 | 第68-69页 |
| ·Ni-NTA组氨酸变性条件亲合色谱 | 第69页 |
| ·WP486(wsv238)基因的片段表达序列 | 第69-71页 |
| ·WP136(wsv492)基因的表达序列 | 第71页 |
| ·WP228(wsv493)基因的表达序列 | 第71-72页 |
| ·免疫电镜定位观察 | 第72-74页 |
| ·虾细胞核提取物的提取 | 第74页 |
| ·对虾腮腺病毒蛋白的提取 | 第74-75页 |
| ·DNA探针的DIG标记 | 第75-76页 |
| ·Northern blot | 第76-77页 |
| ·抗-WSBV重组蛋白多克隆抗体的制备 | 第77页 |
| ·抗-WSBV重组蛋白多克隆抗体的间接ELISA测定 | 第77-78页 |
| ·抗-WSBV重组蛋白多克隆抗体IgG的ProteinA色谱柱纯化 | 第78页 |
| ·Western blot | 第78-79页 |
| ·DNA结合蛋白特异结合位点的确定 | 第79-82页 |
| ·基本原理 | 第79-80页 |
| ·实验过程 | 第80-82页 |
| ·RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)法确定基因5`-端和3`-端序列 | 第82-85页 |
| ·5`-RACE原理及操作步骤 | 第83-84页 |
| ·3`-RACE原理及操作步骤 | 第84-85页 |
| ·抗体亲合色谱提取天然蛋白 | 第85-86页 |
| ·结果与讨论 | 第86-99页 |
| ·WP228(Wsv493)基因的克隆表达、纯化和功能研究 | 第86-89页 |
| ·WP228(Wsv493)基因的克隆表达和纯化 | 第86页 |
| ·WP228蛋白序列及结构特点 | 第86-87页 |
| ·WP228与DNA的结合反应 | 第87-89页 |
| ·WP136(Wsv492)基因的克隆表达、纯化 | 第89-91页 |
| ·WP136(Wsv492)基因的克隆表达、纯化 | 第89-90页 |
| ·WP136(Wsv492)蛋白序列及结构特点 | 第90-91页 |
| ·WP486(Wsv238)基因的克隆表达、纯化和功能研究 | 第91-94页 |
| ·WP486(Wsv238)基因的克隆表达、纯化 | 第91页 |
| ·WP486(Wsv238)蛋白的结构特点 | 第91-93页 |
| ·WP486(Wsv238)蛋白的免疫定位研究 | 第93-94页 |
| ·WP486(Wsv238)基因的体内表达分析 | 第94-99页 |
| ·Northern blot分析 | 第94页 |
| ·WP486(Wsv238)基因的RACE分析 | 第94-96页 |
| ·抗-WP486重组蛋白多克隆抗体的ELISA测定 | 第96页 |
| ·Western blot分析 | 第96-99页 |
| 6 总结 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-125页 |
| 附录1 博士期间撰写的论文、参加的课题及获得奖励 | 第125-126页 |
| 附录2 常规实验试剂及配制 | 第126-132页 |
| 附录3 常规实验方法 | 第132-136页 |
