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温敏核雄性不育水稻育性转换相关基因的克隆及其RNAi植物表达载体的构建

中文摘要第1-8页
英文摘要第8-10页
前言第10-11页
文献综述第11-34页
 1 作物杂种优势及其遗传学基础第11-12页
  1.1 显性假说第11页
  1.2 超显性假说第11-12页
  1.3 基因网络系统与杂种优势第12页
 2 植物雄性不育的遗传机制第12-14页
 3 水稻杂种优势的利用第14-18页
  3.1 我国水稻杂种优势的利用第14-17页
   3.1.1 三系法杂交水稻第14-15页
   3.1.2 两系法杂交水稻第15-17页
  3.2 国外杂交水稻杂种优势的利用第17-18页
   3.2.1 三系法杂交水稻第17页
   3.2.2 两系法杂交水稻第17-18页
 4 水稻雄性不育系的分类第18-20页
  4.1 核质互作不育系第18页
  4.2 光、温敏核不育系第18-20页
   4.2.1 光敏型核不育系第18-19页
   4.2.2 温敏型核不育系第19页
   4.2.3 光温互作型不育系第19-20页
 5 光、温敏核雄性不育水稻的育性转换特征第20-21页
  5.1 光敏核雄性不育水稻的育性转换第20页
  5.2 温敏核雄性不育水稻的育性转换第20-21页
 6 植物雄性不育的分子生物学研究进展第21-23页
  6.1 植物细胞质雄性不育的分子生物学研究进展第21-22页
  6.2 植物细核雄性不育的分子生物学研究进展第22-23页
 7 水稻光、温敏核雄性不育的分子生物学研究进展第23-25页
  7.1 水稻光敏核雄性不育分子生物学研究进展第23-24页
  7.2 水稻温敏核雄性不育分子生物学研究进展第24-25页
 8 基因工程创造植物雄性不育系的研究进展第25-28页
  8.1 破坏绒毡层和降解胼底质创造植物雄性不育性状第25-26页
  8.2 利用RNA酶创造植物雄性不育性状第26页
  8.3 利用职权反义基因技术创造植物雄性不育性状第26-28页
 9 差异基因克隆的主要方法第28-30页
 10 SSH技术的基本原理及其应用第30-34页
  10.1 SSH技术的基本原理和基本流程第30-31页
  10.2 SSH技术的应用研究进展第31-34页
Ⅰ 利用SSH技术克隆温敏核雄性不育水稻育性转换相关基因第34-46页
 1 材料与方法第34-42页
  1.1 材料与试剂第34页
  1.2 方法第34-42页
   1.2.1 水稻幼穗总RNA的提取第34-35页
   1.2.2 mRNA的纯化第35页
   1.2.3 抑制消减杂交第35-40页
   1.2.4 消减eDNA文库的构建第40-41页
   1.2.5 质粒DNA的微量提取第41页
   1.2.6 重组子的酶切鉴定第41-42页
   1.2.7 DNA序列测定与分析第42页
 2 结果与分析第42-46页
  2.1 Tb7s在两种温度条件下育性差别比较第42页
  2.2 抑制消减杂交后PCR扩增cDNA片段结果第42-43页
  2.3 消减效率的鉴定第43页
  2.4 cDNA消减文库的构建第43-44页
  2.5 cDNA消减文库重组子酶切鉴定第44页
  2.6 阳性克隆的DNA序列分析第44-46页
Ⅱ 候选cDNA片段在可育幼穗和不育幼穗中的差异表达分析第46-49页
 1 材料与方法第47-48页
  1.1 材料与试剂第47页
  1.2 方法第47-48页
   1.2.1 水稻幼穗总RNA的提取第47页
   1.2.2 cDNA的合成第47页
   1.2.3 PCR扩增反应第47-48页
 2 结果与分析第48-49页
  2.1 参照物(水稻ubiquitin基因)的RT-PCR定量分析第48-49页
  2.2 候选cDNA片段差异表达的检测分析结果第49页
Ⅲ RACE克隆S2全长cDNA和水稻基因组Southern杂交第49-59页
 1 材料与方法第49-57页
  1.1 材料与试剂第49-50页
  1.2 方法第50-57页
   1.2.1 用RACE技术克隆S2全长cDNA。第50-54页
   1.2.2 Tb7S基因组DNA的Southern杂交第54-57页
 2 结果与分析第57-59页
  2.1 5’-RACE扩增结果第57页
  2.2 3’-RACE扩增结果第57页
  2.3 5’-RACE和3’-RACE扩增片段序列测定第57页
  2.4 S2全长cDNA结构分析第57-58页
  2.5 水稻基因组DNA的Southern杂交结果第58-59页
Ⅳ 遗传转化水稻的RNAi植物表达载体的构建第59-65页
 1 材料与方法第59-64页
  1.1 材料 第59页
  1.2 方法第59-64页
   1.2.1 pCAMBIA2301的改造第59-60页
   1.2.2 中间载体pCAMBIA1301A的构建第60页
   1.2.3 中间载体pCAMBIA1301A-A的构建第60-61页
   1.2.4 中间载体pCAMBIA1301A-A-S的构建第61页
   1.2.5 植物表达载体pCAMBIA1301A-P-A-S的构建第61-64页
 2 结果与分析第64-65页
Ⅴ 农杆菌EHA105介导的水稻遗传转化第65-67页
 1 材料与方法第65-66页
  1.1 材料与试剂第65页
  1.2 方法第65-66页
   1.2.1 质粒pCAMBIA1301A-P-A-S导入农杆菌EHA105第65-66页
   1.2.2 农杆菌EHA105介导的水稻遗传转化第66页
 2 结果与分析第66-67页
Ⅵ 讨论第67-68页
Ⅶ 结论第68-69页
参考文献第69-76页
致谢第76页

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