| 中文摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 引言 | 第13-32页 |
| ·磷脂酶D 的克隆及其家族 | 第13-14页 |
| ·磷脂酶D 的氨基酸结构域 | 第14-18页 |
| ·HKD 结构域 | 第15页 |
| ·IYIENQFF 结构域 | 第15-16页 |
| ·C2 结构域 | 第16页 |
| ·PIP_2 结合域 | 第16-17页 |
| ·PX 结构域 | 第17页 |
| ·PH 结构域 | 第17-18页 |
| ·磷脂酶D 的研究方法 | 第18-19页 |
| ·磷脂酶D 的生化特性 | 第19-21页 |
| ·磷脂酶D 的底物特异性 | 第19页 |
| ·磷脂酶D 活性受Ca~(2+)调控 | 第19-20页 |
| ·磷脂酶D 活性受pH 调控 | 第20页 |
| ·磷脂酰肌醇磷酸类对磷脂酶D 活性的调控 | 第20-21页 |
| ·磷脂酶D 的分布和亚细胞定位 | 第21-22页 |
| ·磷脂酶D 对环境胁迫的响应和信号传导功能 | 第22-31页 |
| ·激素 | 第22-24页 |
| ·渗透胁迫 | 第24-26页 |
| ·低温胁迫 | 第26-27页 |
| ·机械损伤 | 第27-29页 |
| ·病原伤害 | 第29-30页 |
| ·磷胁迫 | 第30-31页 |
| ·展望 | 第31-32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-47页 |
| ·试验材料 | 第32-34页 |
| ·植物材料及处理 | 第32页 |
| ·菌株与质粒 | 第32页 |
| ·酶及生化试剂 | 第32页 |
| ·PCR 引物 | 第32-34页 |
| ·试验方法 | 第34-47页 |
| ·CTAB 法提取黄瓜总RNA | 第34页 |
| ·RNA 电泳检测 | 第34-35页 |
| ·反转录cDNA 第一条链的合成 | 第35页 |
| ·cDNA 纯化(用于5′RACE) | 第35-36页 |
| ·cDNA 末端加尾(用于5′RACE) | 第36-37页 |
| ·黄瓜磷脂酶DαcDNA 全长序列的获得 | 第37-40页 |
| ·琼脂糖凝胶中DNA 片段的回收 | 第40页 |
| ·DNA 片段与克隆载体的连接 | 第40-41页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第41页 |
| ·大肠杆菌的转化及筛选 | 第41-42页 |
| ·碱法小量提取质粒DNA | 第42页 |
| ·DNA 序列的测定 | 第42页 |
| ·不同浓度NO_3~-盐处理下黄瓜磷脂酶Dα基因表达分析 | 第42-43页 |
| ·黄瓜磷脂酶Dα基因反义表达载体的构建 | 第43页 |
| ·黄瓜磷脂酶Dα基因正义表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第44-45页 |
| ·子房注射法转化黄瓜 | 第45-46页 |
| ·黄瓜PLDα序列的生物信息学分析 | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-64页 |
| ·黄瓜磷脂酶DΑ基因的分离 | 第47-52页 |
| ·RNA 的提取及反转录 | 第47页 |
| ·中间片段一和片段二的分离 | 第47-48页 |
| ·3′片段的分离 | 第48页 |
| ·5′片段的分离 | 第48-49页 |
| ·全长cDNA 的分离 | 第49-50页 |
| ·无突变全长cDNA 的构建 | 第50-52页 |
| ·黄瓜磷脂酶DΑ的序列分析 | 第52-59页 |
| ·黄瓜磷脂酶Dα核苷酸序列及推导的氨基酸序列 | 第52页 |
| ·黄瓜磷脂酶Dα氨基酸保守域分析 | 第52-57页 |
| ·磷脂酶D 序列相似性分析 | 第57页 |
| ·磷脂酶D 系统发生分析 | 第57-58页 |
| ·黄瓜磷脂酶Dα疏水性分析 | 第58-59页 |
| ·N03-盐处理下黄瓜磷脂酶DΑ基因的表达分析 | 第59-61页 |
| ·目标基因与内参基因扩增效率一致性的检测 | 第59页 |
| ·目标基因与内参基因融解曲线分析 | 第59-60页 |
| ·NO_3~-盐处理下黄瓜磷脂酶Dα基因的表达 | 第60-61页 |
| ·黄瓜磷脂酶DΑ基因正反义表达载体的构建 | 第61-63页 |
| ·黄瓜磷脂酶Dα反义表达载体的构建 | 第61-62页 |
| ·黄瓜磷脂酶Dα正义表达载体的构建 | 第62-63页 |
| ·黄瓜磷脂酶DΑ转基因研究 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-67页 |
| ·RNA 的提取 | 第64-65页 |
| ·基因全长的获得 | 第65页 |
| ·无突变全长CDNA 的获得 | 第65-66页 |
| ·利用反义RNA 技术研究基因功能 | 第66页 |
| ·N0_3~-处理下黄瓜磷脂酶DΑ的表达 | 第66-67页 |
| 5 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第81页 |