| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-19页 |
| 第一章 前言 | 第19-43页 |
| ·细胞凋亡和细胞坏死 | 第19-25页 |
| ·细胞凋亡和细胞坏死的定义 | 第19-20页 |
| ·细胞凋亡和细胞坏死的机制 | 第20-21页 |
| ·细胞凋亡的机制 | 第20-21页 |
| ·细胞坏死的机制 | 第21页 |
| ·细胞死亡研究中的科学问题 | 第21-25页 |
| ·同一种刺激能诱导不同的细胞死亡 | 第21页 |
| ·细胞凋亡与细胞坏死之间的联系 | 第21-22页 |
| ·线粒体在细胞凋亡与细胞坏死中的作用 | 第22页 |
| ·ROS在细胞坏死中的作用 | 第22-23页 |
| ·zVAD和细胞死亡 | 第23-24页 |
| ·关于细胞坏死机制的最新研究 | 第24-25页 |
| ·肿瘤坏死因子(TNF) | 第25-27页 |
| ·TNF简介 | 第25页 |
| ·TNF能诱导细胞凋亡和细胞坏死 | 第25-27页 |
| ·TNF可作为研究细胞死亡机制的模型 | 第27页 |
| ·受体相互作用蛋白(RIP) | 第27-41页 |
| ·RIP家族简介 | 第27页 |
| ·RIP家族的结构特点 | 第27-28页 |
| ·RIP家族成员介绍 | 第28-41页 |
| ·RIP1 | 第28-33页 |
| ·RIP1简介 | 第28-29页 |
| ·RIP1介导TNF诱导的NF-κB激活 | 第29-30页 |
| ·RIP1参与TRIF信号通路中的NF-κB激活 | 第30-31页 |
| ·RIP1活性的反馈调节 | 第31页 |
| ·RIP1介导细胞死亡 | 第31-32页 |
| ·RIP1的选择:存活或死亡 | 第32-33页 |
| ·RIP2 | 第33-35页 |
| ·RIP2简介 | 第33页 |
| ·RIP2在先天免疫反应中的作用 | 第33-35页 |
| ·RIP2在适应性免疫反应中的作用 | 第35页 |
| ·RIP3 | 第35-40页 |
| ·RIP3简介 | 第35页 |
| ·RIP3能诱导某些细胞凋亡 | 第35-36页 |
| ·RIP3抑制NF-κB的激活 | 第36-37页 |
| ·过量表达RIP3诱导NF-κ3的激活 | 第37-38页 |
| ·RIP3在细胞内的定位 | 第38-39页 |
| ·RIP3的两个剪切异构体:RIP3β和RIP3γ | 第39-40页 |
| ·RIP4 | 第40页 |
| ·RIP家族的其它成员 | 第40-41页 |
| ·立题背景 | 第41-43页 |
| 第二章 材料和方法 | 第43-73页 |
| ·实验相关药品和试剂 | 第43-44页 |
| ·实验室主要仪器 | 第44页 |
| ·DNA相关实验和方法 | 第44-61页 |
| ·质粒载体 | 第44-48页 |
| ·普通真核表达载体 | 第44-45页 |
| ·慢病毒载体 | 第45页 |
| ·RNA干扰载体 | 第45-48页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和质粒转化 | 第48-49页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第48页 |
| ·质粒转化感受态细胞 | 第48-49页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第49-51页 |
| ·小量提取质粒DNA(STET煮沸法) | 第49页 |
| ·中量提取质粒DNA(碱裂解法) | 第49-50页 |
| ·大量提取质粒DNA(CsCl密度梯度离心法) | 第50-51页 |
| ·质粒DNA的工具酶处理 | 第51-52页 |
| ·DNA的限制性内切酶消化 | 第51页 |
| ·双链DNA 5’突出末端平滑化 | 第51-52页 |
| ·线性DNA 5’末端磷酸化 | 第52页 |
| ·线性DNA 5’末端磷酸基团的移除 | 第52页 |
| ·DNA的回收和纯化 | 第52-53页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第52-53页 |
| ·从琼脂糖凝胶中回收DNA | 第53页 |
| ·从溶液中回收DNA | 第53页 |
| ·DNA连接反应 | 第53-54页 |
| ·cDNA表达谱芯片检测细胞内基因表达情况 | 第54页 |
| ·PCR相关实验 | 第54-56页 |
| ·普通PCR.反应 | 第54-55页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第55页 |
| ·点突变 | 第55-56页 |
| ·引物设计 | 第55页 |
| ·点突变流程 | 第55-56页 |
| ·应用RT-PCR检测特定基因的表达情况 | 第56-58页 |
| ·细胞总RNA提取 | 第56-57页 |
| ·逆转录合成cDNA | 第57页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第57-58页 |
| ·质粒载体的构建 | 第58-61页 |
| ·RIP3及RIP3各种突变和缺失体的构建 | 第58-59页 |
| ·RIP1慢病毒表达载体的构建 | 第59页 |
| ·PYGL、GLUL和GLUD1表达载体的构建 | 第59-60页 |
| ·shRNA引物设计 | 第60-61页 |
| ·细胞相关实验和方法 | 第61-66页 |
| ·细胞培养 | 第61-62页 |
| ·细胞培养基及相关溶液配制 | 第61页 |
| ·细胞的培养和传代 | 第61-62页 |
| ·细胞转染 | 第62-63页 |
| ·磷酸钙转染法 | 第62页 |
| ·脂质体2000转染法 | 第62-63页 |
| ·稳定表达细胞株的筛选 | 第63页 |
| ·慢病毒包装与感染 | 第63-64页 |
| ·慢病毒的包装 | 第63-64页 |
| ·慢病毒感染目的细胞 | 第64页 |
| ·细胞存活率和ROS水平分析 | 第64-66页 |
| ·利用流式细胞仪检测细胞存活率 | 第64-65页 |
| ·MTT法检测细胞存活率 | 第65-66页 |
| ·利用流式细胞仪测量细胞内ROS水平 | 第66页 |
| ·蛋白质相关实验和方法 | 第66-68页 |
| ·免疫共沉淀 | 第66-67页 |
| ·免疫印迹 | 第67页 |
| ·相关溶液配制 | 第67-68页 |
| ·酶活性测定 | 第68-73页 |
| ·糖原磷酸化酶(PYGL)活性测定 | 第68-70页 |
| ·谷氨酰胺合成酶(GLUL)活性测定 | 第70-71页 |
| ·谷氨酸脱氢酶(GLUD1)活性测定 | 第71-73页 |
| 第三章 结果与分析 | 第73-114页 |
| ·TNF引发两株NIH.3T3细胞以不同的方式死亡 | 第73-74页 |
| ·两株NIH-3T3细胞对TNF+zVAD的敏感性不同 | 第73-74页 |
| ·TNF分别诱导A细胞凋亡和N细胞坏死 | 第74页 |
| ·RIP3是细胞凋亡与细胞坏死相互转换的分子开关 | 第74-84页 |
| ·cDNA表达谱芯片分析两株细胞基因表达的差异 | 第74-75页 |
| ·RIP3是导致两株细胞不同死亡方式的主因 | 第75-76页 |
| ·RIP3在两株细胞内表达的差异 | 第76-77页 |
| ·RIP3是TNF诱导的N细胞坏死所必需 | 第77-78页 |
| ·重建了RIP3的A细胞表现出跟N细胞相同的死亡方式 | 第78-79页 |
| ·RIP3的激酶活性和RHIM结构域是其细胞死亡转换功能所必需 | 第79-82页 |
| ·RIP3是TNF诱导的L929细胞坏死所必需 | 第82-83页 |
| ·RIP3是zVAD引发的小鼠腹腔巨噬细胞坏死所必需 | 第83-84页 |
| ·RIP3与RIP1在细胞死亡过程中的相互关系 | 第84-90页 |
| ·RIP1是TNF诱导的N细胞和L929细胞死亡所必需 | 第84-85页 |
| ·过量表达RIP1诱导无RIP3的细胞凋亡和有RIP3的细胞坏死 | 第85-87页 |
| ·过量表达RIP1分别诱导A细胞凋亡和N细胞坏死 | 第87-88页 |
| ·RIP3和RIP1在过量表达导致的NIH-3T3细胞死亡中的关系 | 第88-90页 |
| ·RIP3介导细胞坏死的下游作用靶蛋白 | 第90-94页 |
| ·鉴定细胞坏死过程中与RIP3发生相互作用的蛋白 | 第90-92页 |
| ·RIP3能与PYGL、GLUL和GLUD1相互作用 | 第92-94页 |
| ·RIP3通过调节能量代谢介导细胞坏死 | 第94-102页 |
| ·RIP3能激活PYGL从而促进细胞能量代谢 | 第94-98页 |
| ·RIP3与PYGL在细胞坏死过程中发生相互作用 | 第94-95页 |
| ·RIP3能增强PYGL的活性 | 第95-98页 |
| ·敲低PYGL水平能抑制N细胞坏死 | 第98页 |
| ·RIP3能激活GLUL和GLUD1从而促进细胞能量代谢 | 第98-102页 |
| ·RIP3在细胞坏死过程中与GLUL和GLUD1相互作用 | 第98-99页 |
| ·RIP3能增强GLUL和GLUD1的活性 | 第99-101页 |
| ·敲低GLUL或GLUD1水平能抑制N细胞坏死 | 第101-102页 |
| ·RIP3介导的细胞坏死需要ROS的积聚 | 第102-108页 |
| ·N细胞坏死依赖于ROS的积聚 | 第102-104页 |
| ·RIP3是可导致细胞坏死的ROS积聚所必需 | 第104-105页 |
| ·PYGL、GLUL和GLUD1参与TNF+zVAD诱导的ROS产生 | 第105-106页 |
| ·能量代谢抑制剂对ROS产生和细胞死亡的作用 | 第106-108页 |
| ·能量代谢与ROS及细胞死亡相关 | 第108页 |
| ·zVAD增强RIP3介导的细胞坏死的机理探讨 | 第108-110页 |
| ·RIP3与细胞坏死相关疾病的关系 | 第110-112页 |
| ·总结 | 第112-114页 |
| 附录1 图表索引 | 第114-116页 |
| 附录2 缩略语及中英文对照 | 第116-123页 |
| 参考文献 | 第123-138页 |
| 在学期间发表的文章 | 第138-139页 |
| 致谢 | 第139页 |
