| 中国农业科学院博士学位论文评阅人、答辩委员会签名表 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 英文缩略表 | 第9-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-32页 |
| ·禽流感病毒对犬的致病性研究 | 第14-24页 |
| ·高致病性禽流感病毒流行情况及趋势 | 第15-16页 |
| ·HAPI H5N1 亚型禽流感病毒的扩散 | 第16页 |
| ·犬流感的最新研究进展 | 第16-20页 |
| ·H5N1 亚型禽流感病毒的跨宿主传播和致病机制 | 第20-23页 |
| ·犬致病性研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| ·抗H5N1 亚型禽流感病毒人源化单克隆抗体的初步探索 | 第24-32页 |
| ·抗体基本结构和抗原结合位点 | 第24-25页 |
| ·单克隆抗体发展以及人源化抗体演变 | 第25-27页 |
| ·人源化改造的方法 | 第27-29页 |
| ·预防和治疗禽流感的研究概况 | 第29-31页 |
| ·目的和意义 | 第31-32页 |
| 第二章 H5N1 亚型流感病毒对犬的致病性研究 | 第32-43页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·病毒株 | 第32页 |
| ·试剂 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-33页 |
| ·实验动物与分组 | 第32页 |
| ·感染实验 | 第32页 |
| ·临床观察与样品采集 | 第32-33页 |
| ·病毒滴定 | 第33页 |
| ·组织病理学和免疫组织化学分析 | 第33页 |
| ·血清抗体检测 | 第33页 |
| ·结果 | 第33-43页 |
| ·临床症状和排毒情况 | 第33-36页 |
| ·病毒在体内的复制情况 | 第36-37页 |
| ·剖检变化和病理组织变化 | 第37-39页 |
| ·抗体检测结果 | 第39-43页 |
| 第三章 抗H5N1 亚型禽流感病毒猴源噬菌体scFv 的构建及可溶性表达 | 第43-61页 |
| ·材料 | 第43-45页 |
| ·细胞株 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·引物的设计和合成 | 第43页 |
| ·噬菌体展示所需缓冲液和培养基 | 第43-45页 |
| ·方法 | 第45-53页 |
| ·细胞总RNA 的抽提 | 第45-46页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第46页 |
| ·PCR 扩增抗体V 区基因 | 第46-47页 |
| ·scFv 的构建 | 第47-48页 |
| ·scFv 产物的酶切处理 | 第48页 |
| ·scFv 与pCANTAB 5 E 连接 | 第48-49页 |
| ·E.coil TG1 细胞的保存和制备 | 第49页 |
| ·TG1 感受态细胞的制备 | 第49页 |
| ·转化 | 第49页 |
| ·检测转化效率 | 第49-50页 |
| ·救活噬菌体抗体库 | 第50页 |
| ·单链噬菌体库的富集淘选 | 第50-51页 |
| ·准备the Master plate | 第51-52页 |
| ·阳性克隆重组噬菌体准备 | 第52页 |
| ·在HB2151 细胞上稳定产生可溶抗体 | 第52页 |
| ·提取胞周质抗体和上清中的抗体 | 第52-53页 |
| ·Western blot 检测粗提蛋白 | 第53页 |
| ·scFv 的纯化 | 第53页 |
| ·间接免疫荧光 | 第53页 |
| ·竞争抑制ELISA | 第53页 |
| ·结果 | 第53-61页 |
| ·单克隆抗体V_H、V_L 基因片段的扩增 | 第53-54页 |
| ·单链抗体scFv 的构建 | 第54页 |
| ·噬菌体抗体库的淘筛与鉴定 | 第54-55页 |
| ·阳性克隆株的淘筛 | 第55页 |
| ·阳性克隆株DNA 序列的测定 | 第55-56页 |
| ·Western blot 免疫印迹法鉴定单链抗体 | 第56-57页 |
| ·scFv 的纯化 | 第57页 |
| ·间接免疫荧光鉴定 | 第57-58页 |
| ·竞争抑制ELISA 检测scFv 的抗原结合活性 | 第58-61页 |
| 第四章 鼠源人源化抗体的构建及其瞬时表达 | 第61-72页 |
| ·材料 | 第61-62页 |
| ·细胞株、菌株和质粒 | 第61页 |
| ·主要试剂 | 第61页 |
| ·主要引物 | 第61-62页 |
| ·方法 | 第62-65页 |
| ·鼠源单克隆抗体可变区基因的扩增 | 第62页 |
| ·鼠源抗体可变区的克隆和序列测定和分析 | 第62页 |
| ·人源化抗体的设计 | 第62-63页 |
| ·人IgG-Fc 基因片段的合成 | 第63页 |
| ·真核表达全抗体载体的构建 | 第63-64页 |
| ·重组表达载体的瞬时转染 | 第64页 |
| ·Western blot 检测全抗体的表达 | 第64页 |
| ·间接免疫荧光检测全抗体的表达 | 第64-65页 |
| ·结果 | 第65-72页 |
| ·鼠源抗体可变区VH、VL 基因片段的扩增 | 第65页 |
| ·鼠源可变区基因片段的DNA 序列测定和IMGT 分析 | 第65-66页 |
| ·鼠源人源化序列的设计 | 第66-67页 |
| ·全抗体表达载体的构建 | 第67-68页 |
| ·人源化抗体IgG_1 的瞬时表达 | 第68-72页 |
| 第五章 全文结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 个人简历 | 第85页 |
