| 致谢 | 第1-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 摘要 | 第10-16页 |
| 1 球孢白僵菌胁迫生物学及毒力遗传改良的研究现状 | 第16-36页 |
| ·害虫生防真菌的胁迫生物学基础 | 第16-21页 |
| ·影响生防真菌制剂防效的环境胁迫因子 | 第16-19页 |
| ·提高生防菌剂抗逆力和毒力的技术途径 | 第19-21页 |
| ·丝状真菌中甘露醇代谢及其抗逆生物学功能 | 第21-26页 |
| ·甘露醇的结构与分布 | 第21页 |
| ·真菌中甘露醇代谢途径及相关酶系 | 第21-23页 |
| ·真菌中甘露醇的生物学功能 | 第23-26页 |
| ·真菌的过氧化氢酶(CAT)及其抗逆生物学功能 | 第26-30页 |
| ·CAT的分类 | 第26页 |
| ·CAT的结构及催化特性 | 第26-28页 |
| ·真菌CAT的表达调控 | 第28-29页 |
| ·真菌CAT的生理功能 | 第29-30页 |
| ·丝孢类生防真菌的毒力基因工程改良的研究 | 第30-34页 |
| ·生防真菌的遗传转化 | 第31-32页 |
| ·基于Vip3A基因的生防真菌毒力的遗传改造 | 第32-34页 |
| ·展望 | 第34-36页 |
| 2 球孢白僵菌甘露醇1-磷酸脱氢酶的基因克隆、表达纯化及酶学特征分析 | 第36-46页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·菌株和载体 | 第36-37页 |
| ·试剂 | 第37页 |
| ·试剂配置 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-41页 |
| ·DNA的提取 | 第37-38页 |
| ·RNA的提取 | 第38页 |
| ·BbMPD基因的分离与克隆 | 第38-39页 |
| ·BbMPD的原核表达与纯化 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白SDS-PAGE鉴定 | 第40页 |
| ·纯化BbMPD的酶特征分析 | 第40-41页 |
| ·结果 | 第41-44页 |
| ·BbMPD的基因克隆与序列分析 | 第41-43页 |
| ·BbMPD的纯化和酶特性分析 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| 3 球孢白僵菌甘露醇代谢相关酶基因的克隆与功能解析 | 第46-64页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·菌株和载体 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-54页 |
| ·甘露醇脱氢酶BbMTD基因的克隆与序列分析 | 第47-49页 |
| ·BbMTD/BbMPD基因表达的实时定量PCR分析 | 第49页 |
| ·BbMTD和BbMPD基因敲除载体的构建及转化 | 第49-50页 |
| ·BbMTD和BbMPD基因敲除转化子的鉴定 | 第50-51页 |
| ·BbMTD和BbMPD基因敲除转化子的表型分析 | 第51-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-61页 |
| ·BbMTD基因的克隆及序列分析 | 第54-55页 |
| ·BbMPD和BbMTD的转录表达 | 第55-56页 |
| ·敲除转化子的鉴定 | 第56-57页 |
| ·敲除株酶活和甘露醇含量分析 | 第57-58页 |
| ·产孢量比较 | 第58页 |
| ·不同碳源对敲除株生长发育的影响 | 第58-59页 |
| ·敲除株抗逆性状的变化 | 第59-61页 |
| ·敲除株的毒力变化 | 第61页 |
| ·讨论 | 第61-64页 |
| 4 球孢白僵菌过氧化氢酶(CAT)基因家族及其功能解析 | 第64-78页 |
| ·材料 | 第65页 |
| ·菌株、载体和试剂 | 第65页 |
| ·方法 | 第65-68页 |
| ·球孢白僵菌CAT基因的克隆与序列分析 | 第65页 |
| ·CAT基因表达的实时定量PCR(qRT-PCR)分析 | 第65-66页 |
| ·CAT基因敲除载体的构建及转化 | 第66-67页 |
| ·各CAT基因敲除转化子的表型分析 | 第67-68页 |
| ·结果与分析 | 第68-75页 |
| ·球孢白僵菌CAT基因的种类与序列特征 | 第68-69页 |
| ·球孢白僵菌CAT基因的转录表达格局 | 第69-71页 |
| ·敲除转化子的鉴定 | 第71-72页 |
| ·敲除株CAT酶活和活性染色 | 第72-73页 |
| ·敲除株抗逆性状比较 | 第73-74页 |
| ·敲除株毒力比较 | 第74-75页 |
| ·讨论 | 第75-78页 |
| 5 超高表达昆虫肠毒因子Vip3Aa1的球孢白僵菌工程株构建及其对斜纹夜蛾毒力的测定 | 第78-96页 |
| ·材料 | 第79页 |
| ·菌株和载体 | 第79页 |
| ·试剂 | 第79页 |
| ·方法 | 第79-87页 |
| ·球孢白僵菌hyd1基因启动子片段克隆及序列优化 | 第79-81页 |
| ·优化启动子驱动的vip3Aa1双元载体构建及真菌转化 | 第81-82页 |
| ·转化子的鉴定及高表达菌株的筛选 | 第82-84页 |
| ·BbHV8分生孢子中Vip3Aa1蛋白的表达分析 | 第84-85页 |
| ·生物测定 | 第85-86页 |
| ·幼虫中肠液中Vip3Aa1的检测 | 第86-87页 |
| ·结果与分析 | 第87-93页 |
| ·疏水蛋白基因启动子(Phyd1)片段克隆及序列分析 | 第87页 |
| ·Phyd1片段优化 | 第87-89页 |
| ·Phyd1-t1启动Vip3Aa1高表达的转化株筛选 | 第89页 |
| ·BbHV8对斜纹夜蛾的毒力 | 第89-93页 |
| ·讨论 | 第93-96页 |
| 6 结语 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-110页 |
| Summary | 第110-114页 |
