| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 缩略词表 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-33页 |
| 1 副猪嗜血杆菌研究进展 | 第16-21页 |
| ·副猪嗜血杆菌生物学特性 | 第16-18页 |
| ·副猪嗜血杆菌致病因子 | 第18-20页 |
| ·副猪嗜血杆菌基因研究现状 | 第20-21页 |
| 2 基因组文库构建技术及其筛选策略 | 第21-25页 |
| ·基因组文库构建的基本原理及主要步骤 | 第21-23页 |
| ·基因组文库的主要筛选策略 | 第23-25页 |
| 3 细菌毒力基因体内表达检测系统研究进展 | 第25-33页 |
| ·细菌毒力基因体内表达检测方法研究进展 | 第25-27页 |
| ·体内诱导抗原鉴定技术基本原理及步骤 | 第27-29页 |
| ·体内诱导抗原鉴定技术的优点与缺点 | 第29-30页 |
| ·体内诱导抗原鉴定技术的应用与展望 | 第30-33页 |
| 第二章 副猪嗜血杆菌SC-1株基因组表达文库的构建及鉴定研究 | 第33-53页 |
| 1 引言 | 第33页 |
| 2 材料 | 第33-36页 |
| ·菌株及质粒 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·培养基及试剂配制 | 第34-36页 |
| ·主要仪器设备 | 第36页 |
| 3 方法 | 第36-45页 |
| ·副猪嗜血杆菌SC-1株的活化 | 第36页 |
| ·副猪嗜血杆菌SC-1株基因组DNA提取 | 第36-37页 |
| ·副猪嗜血杆菌SC-1株基因组酶切 | 第37-39页 |
| ·副猪嗜血杆菌SC-1株基因组DNA片段的回收 | 第39页 |
| ·构建文库使用载体的制备 | 第39-41页 |
| ·副猪嗜血杆菌SC-1株基因组文库构建 | 第41-44页 |
| ·副猪嗜血杆菌SC-1株基因组文库的PCR鉴定 | 第44-45页 |
| ·重组质粒测序及序列分析 | 第45页 |
| 4 结果与分析 | 第45-49页 |
| ·副猪嗜血杆菌SC-1株的活化 | 第45-46页 |
| ·副猪嗜血杆菌SC-1株基因组DNA提取 | 第46页 |
| ·副猪嗜血杆菌SC-1株基因组酶切 | 第46-47页 |
| ·副猪嗜血杆菌SC-1株基因组DNA片段的回收 | 第47-48页 |
| ·构建文库使用载体的制备 | 第48页 |
| ·副猪嗜血杆菌SC-1株基因组文库构建 | 第48页 |
| ·副猪嗜血杆菌SC-1株基因组文库的PCR鉴定及插入率估算 | 第48-49页 |
| ·重组质粒测序及序列分析 | 第49页 |
| 5 讨论 | 第49-52页 |
| ·基因组DNA的质量 | 第49-50页 |
| ·限制性内切酶的选择 | 第50-51页 |
| ·表达载体的选择 | 第51页 |
| ·基因组文库的质量 | 第51-52页 |
| 6 小结 | 第52-53页 |
| 第三章 副猪嗜血杆菌SC-1株体内诱导抗原基因的初步筛选及鉴定研究 | 第53-79页 |
| 1 引言 | 第53页 |
| 2 材料 | 第53-55页 |
| ·菌株、血清及试验动物 | 第53页 |
| ·主要试剂 | 第53-54页 |
| ·试剂配制 | 第54-55页 |
| ·主要仪器设备 | 第55页 |
| 3 方法 | 第55-64页 |
| ·人工感染康复血清的制备 | 第55-56页 |
| ·副猪嗜血杆菌SC-1株人工感染混合猪血清的吸附 | 第56-58页 |
| ·血清最佳稀释倍数的确定 | 第58页 |
| ·副猪嗜血杆菌SC-1株基因组文库的筛选 | 第58-60页 |
| ·假定阳性抗原克隆的重复筛选 | 第60页 |
| ·假定阳性抗原克隆的第三次筛选 | 第60-61页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定 | 第61页 |
| ·体内诱导抗原基因的测序及生物信息学分析 | 第61-62页 |
| ·体内诱导抗原基因的RT-PCR鉴定 | 第62-64页 |
| 4 结果与分析 | 第64-75页 |
| ·人工感染康复血清的制备 | 第64-65页 |
| ·副猪嗜血杆菌SC-1株人工感染混合猪血清的吸附 | 第65-67页 |
| ·血清最佳稀释倍数的确定 | 第67页 |
| ·副猪嗜血杆菌SC-1株基因组文库的筛选 | 第67-68页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定 | 第68页 |
| ·体内诱导抗原基因的测序及生物信息学分析 | 第68-73页 |
| ·体内诱导抗原基因的RT-PCR鉴定 | 第73-75页 |
| 5 讨论 | 第75-78页 |
| ·血清探针的制备和鉴定 | 第75-76页 |
| ·体内诱导抗原基因的筛选 | 第76页 |
| ·体内诱导抗原基因的生物信息学分析 | 第76-78页 |
| 6 小结 | 第78-79页 |
| 第四章 副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白的克隆表达及其免疫原性初步研究 | 第79-101页 |
| 1 引言 | 第79页 |
| 2 材料 | 第79-81页 |
| ·菌株、血清及试验动物 | 第79页 |
| ·主要试剂 | 第79-80页 |
| ·试剂配制 | 第80-81页 |
| ·主要仪器设备 | 第81页 |
| 3 方法 | 第81-88页 |
| ·副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白(CAPSULAR POLYSACCHARIDE EXPORTPROTEIN,CPEP)基因的扩增 | 第81-82页 |
| ·副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白基因的克隆及鉴定 | 第82-84页 |
| ·重组质粒的序列测定及序列分析 | 第84页 |
| ·原核表达载体PET32A-CPEP的构建与鉴定 | 第84页 |
| ·重组质粒转化E.COLI BL21(DE3) | 第84-85页 |
| ·重组荚膜多糖输出蛋白的表达与鉴定 | 第85-86页 |
| ·重组荚膜多糖输出蛋白的纯化 | 第86-87页 |
| ·重组荚膜多糖输出蛋白免疫保护性研究 | 第87-88页 |
| 4 结果及分析 | 第88-96页 |
| ·副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白基因的扩增 | 第88页 |
| ·副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白基因的T-A克隆及鉴定 | 第88-90页 |
| ·重组质粒的序列测定及序列分析 | 第90-91页 |
| ·原核表达载体PET32A-CPEP的构建与鉴定 | 第91页 |
| ·重组荚膜多糖输出蛋白的表达与鉴定 | 第91-94页 |
| ·重组荚膜多糖输出蛋白的纯化 | 第94-95页 |
| ·重组荚膜多糖输出蛋白免疫保护性研究 | 第95-96页 |
| 5 讨论 | 第96-100页 |
| ·表达基因的选择 | 第96-97页 |
| ·表达系统的选择 | 第97-98页 |
| ·表达产物的免疫反应原性 | 第98页 |
| ·重组蛋白的表达纯化 | 第98-99页 |
| ·重组蛋白免疫原性 | 第99-100页 |
| 6 小结 | 第100-101页 |
| 本论文创新性工作 | 第101-102页 |
| 结论 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-113页 |
| 致谢 | 第113-115页 |
| 附录 | 第115-128页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第128页 |
