| 本论文的创新性工作 | 第1-14页 |
| 中文摘要 | 第14-17页 |
| ABSTRACT | 第17-21页 |
| 常用英文缩写词汇 | 第21-23页 |
| 第一部分 文献综述 | 第23-35页 |
| 第一章 疱疹病毒UL51基因及其编码蛋白的研究进展 | 第23-35页 |
| 1. 疱疹病毒UL51基因的特点 | 第25-27页 |
| ·疱疹病毒UL51基因在基因组中定位 | 第25-27页 |
| ·疱疹病毒UL51基因的类型 | 第27页 |
| 2. 疱疹病毒UL51基因编码蛋白的特点 | 第27-29页 |
| ·UL51基因编码蛋白的表达和基本特性 | 第27-28页 |
| ·UL51基因编码蛋白的定位特性 | 第28-29页 |
| ·UL51蛋白的亚细胞定位 | 第28-29页 |
| ·UL51蛋白在病毒自身内的定位 | 第29页 |
| 3. 疱疹病毒UL51蛋白的功能 | 第29-32页 |
| ·疱疹病毒的装配概述 | 第29-30页 |
| ·疱疹病毒皮层蛋白的功能概述 | 第30-32页 |
| ·疱疹病毒UL51蛋白功能的研究进展 | 第32页 |
| 4. 疱疹病毒UL51蛋白与其它蛋白的相互作用 | 第32-34页 |
| 5. 展望 | 第34-35页 |
| 第二部分 实验研究 | 第35-171页 |
| 第二章 DPV UL51基因的序列特征及密码子偏爱性分析 | 第35-52页 |
| 摘要 | 第35-36页 |
| 1. 试验数据 | 第36页 |
| 2. 试验方法 | 第36-38页 |
| ·DPV UL51基因的生物信息学分析方法 | 第36-37页 |
| ·DPV UL51基因的密码子偏爱性分析方法 | 第37-38页 |
| 3. 试验结果 | 第38-48页 |
| ·DPV UL51蛋白质序列生物信息学分析 | 第38-44页 |
| ·DPV UL51基因编码蛋白的保守结构区 | 第38-39页 |
| ·DPV UL51基因的系统进化分析 | 第39-40页 |
| ·DPV UL51基因编码蛋白的基本理化性质 | 第40-41页 |
| ·DPV UL51基因编码蛋白的亚细胞定位分析结果 | 第41-42页 |
| ·DPV UL51蛋白翻译后修饰预测 | 第42-43页 |
| ·DPV UL51蛋白的疏水性分析 | 第43页 |
| ·DPV UL51蛋白的抗原性分析 | 第43-44页 |
| ·DPV UL51蛋白的二级结构分析 | 第44页 |
| ·DPV UL51蛋白的三级结构分析 | 第44页 |
| ·DPV UL51基因密码子偏爱性分析 | 第44-48页 |
| ·DPV与17种疱疹病毒间UL51基因密码子使用偏爱分析 | 第44-45页 |
| ·DPV UL51基因密码子使用频率和氨基酸组成偏爱分析 | 第45-47页 |
| ·DPV UL51基因与大肠杆菌、酵母及人的密码子使用偏爱性比较 | 第47-48页 |
| 4. 讨论 | 第48-51页 |
| ·DPV UL51蛋白与其它α-疱疹病毒UL51蛋白的系统进化关系 | 第48页 |
| ·DPV UL51蛋白一般理化特征 | 第48页 |
| ·DPV UL51蛋白亚细胞定位预测 | 第48-49页 |
| ·DPV UL51蛋白翻译后修饰 | 第49页 |
| ·DPV UL51蛋白的抗原性和高级结构特点 | 第49-50页 |
| ·DPV UL51基因密码子偏爱性分析及其对表达的影响 | 第50-51页 |
| 5. 小结 | 第51页 |
| Abstract | 第51-52页 |
| 第三章 鸭瘟病毒UL51基因的克隆、原核表达、产物纯化及其多克隆抗体制备 | 第52-72页 |
| 摘要 | 第52页 |
| 1. 试验材料 | 第52-56页 |
| ·菌株、质粒和毒株 | 第52-54页 |
| ·试验动物 | 第54页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第54-56页 |
| ·基因克隆表达相关试剂 | 第54-55页 |
| ·SDS-PAGE电泳相关试剂 | 第55页 |
| ·琼脂糖电泳相关试剂 | 第55页 |
| ·弗氏佐剂 | 第55-56页 |
| ·主要仪器设备 | 第56页 |
| 2. 试验方法 | 第56-63页 |
| ·DPV UL51基因的克隆 | 第56-58页 |
| ·引物设计 | 第56页 |
| ·DPV基因组DNA的提取 | 第56-57页 |
| ·PCR扩增DPV UL51基因 | 第57页 |
| ·UL51基因PCR产物的回收 | 第57页 |
| ·纯化的UL51基因与pMD18-T的连接 | 第57页 |
| ·DH5a感受态细胞的制备 | 第57-58页 |
| ·转化感受态细胞 | 第58页 |
| ·质粒的抽提 | 第58页 |
| ·重组质粒的PCR和酶切鉴定 | 第58页 |
| ·UL51基因序列测定 | 第58页 |
| ·原核表达质粒pET28a-UL51的构建、诱导表达与条件优化 | 第58-61页 |
| ·原核表达质粒pET28a-UL51的构建与鉴定 | 第58-59页 |
| ·重组表达质粒pET28a-UL51的诱导表达 | 第59-60页 |
| ·重组质粒pET28a-UL5 1诱导条件的优化 | 第60-61页 |
| ·重组UL51蛋白的大量制备、纯化与复性 | 第61页 |
| ·重组UL51蛋白的大量制备(包涵体处理) | 第61页 |
| ·重组UL51蛋白的纯化 | 第61页 |
| ·重组UL51蛋白的复性 | 第61页 |
| ·兔抗重组UL51蛋白抗体的制备、效价测定与纯化 | 第61-63页 |
| ·兔抗重组UL51蛋白高免血清的制备 | 第61-62页 |
| ·兔抗重组UL51蛋白高免血清效价测定 | 第62页 |
| ·兔抗重组UL51蛋白抗体IgG的纯化 | 第62-63页 |
| 3. 试验结果 | 第63-69页 |
| ·DPV UL51基因的扩增、T-克隆与鉴定结果 | 第63-64页 |
| ·UL51基因的PCR扩增结果 | 第63页 |
| ·UL51基因T克隆鉴定结果 | 第63-64页 |
| ·原核表达质粒pET28a-UL51的构建与鉴定、诱导表达及其优化结果 | 第64-67页 |
| ·重组表达质粒pET28a-UL51的构建与酶切鉴定 | 第64-65页 |
| ·重组质粒pET28a-UL51的诱导表达 | 第65页 |
| ·重组质粒pET28a-UL51诱导表达条件的优化 | 第65-67页 |
| ·重组UL51蛋白的纯化结果 | 第67-68页 |
| ·兔抗重组UL51蛋白抗体的效价测定与纯化结果 | 第68-69页 |
| ·兔抗重组UL51蛋白高免血清效价测定 | 第68页 |
| ·兔抗重组UL51蛋白抗体IgG的纯化 | 第68-69页 |
| 4. 讨论 | 第69-71页 |
| ·基因的引物设计和克隆测序 | 第69-70页 |
| ·表达系统的选择 | 第70页 |
| ·疱疹病毒UL51基因的原核表达 | 第70页 |
| ·兔抗重组UL51蛋白抗体的制备和纯化 | 第70-71页 |
| 5. 小结 | 第71页 |
| Abstract | 第71-72页 |
| 第四章 鸭瘟病毒UL51基因在感染宿主细胞中的转录和表达特征 | 第72-85页 |
| 摘要 | 第72页 |
| 1 试验材料 | 第72-73页 |
| ·病毒和抗体 | 第72页 |
| ·试验动物 | 第72页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第72-73页 |
| ·细胞培养相关试剂 | 第72-73页 |
| ·Western blotting相关试剂 | 第73页 |
| ·主要仪器和用品 | 第73页 |
| 2 试验方法 | 第73-77页 |
| ·荧光定量RT-PCR方法检测DPV UL51基因在感染宿主细胞中的转录时相 | 第73-76页 |
| ·引物设计与合成 | 第73-74页 |
| ·细胞培养及采样 | 第74页 |
| ·总RNA提取 | 第74页 |
| ·去除RNA中的DNA | 第74页 |
| ·RNA完整性及纯度测定 | 第74页 |
| ·逆转录 | 第74-75页 |
| ·目的片段的PCR扩增及回收 | 第75页 |
| ·荧光定量PCR | 第75-76页 |
| ·荧光定量PCR扩增标准曲线的建立 | 第76页 |
| ·数据分析和处理 | 第76页 |
| ·Western blotting检测DPV UL51基因在感染宿主细胞中的表达时相 | 第76-77页 |
| ·细胞培养及采样时间 | 第76页 |
| ·细胞样品处理和SDS-PAGE电泳 | 第76页 |
| ·Western blotting检测 | 第76-77页 |
| ·Westem blotting检测DPV UL51基因表达产物是否为DPV粒子的组成成分 | 第77页 |
| ·细胞培养及病毒纯化 | 第77页 |
| ·Westem blotting检测 | 第77页 |
| 3 试验结果 | 第77-81页 |
| ·DPV UL51基因在宿主细胞中的转录时相分析结果 | 第77-80页 |
| ·RNA完整性及纯度分析 | 第77-78页 |
| ·RT-PCR检测 | 第78页 |
| ·荧光定量PCR检测标准曲线的建立 | 第78-79页 |
| ·DPV UL51基因在宿主细胞中的转录量分析 | 第79-80页 |
| ·DPV UL51基因在宿主细胞中的表达时相分析结果 | 第80-81页 |
| ·细胞蛋白的提取及SDS-PAGE检测 | 第80页 |
| ·DPV UL51基因产物在宿主细胞中的表达时相分析 | 第80-81页 |
| ·DPV UL51基因表达产物是DPV粒子的一种组成成分 | 第81页 |
| 4 讨论 | 第81-84页 |
| ·DPV UL51基因在宿主细胞中的转录时相分析 | 第81-83页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR方法检测DPV UL51基因在宿主细胞中的转录时相方法的建立与优化 | 第81-82页 |
| ·疱疹病毒UL51基因转录时相的比较 | 第82-83页 |
| ·DPV UL51基因在宿主细胞中的表达时相分析 | 第83-84页 |
| ·Western blotting方法检测DPV UL51基因在宿主细胞中的表达时相分析 | 第83页 |
| ·疱疹病毒UL51蛋白表达时相的比较 | 第83-84页 |
| 5 小结 | 第84页 |
| Abstract | 第84-85页 |
| 第五章 鸭瘟病毒UL51蛋白在病毒感染细胞中的定位 | 第85-97页 |
| 摘要 | 第85页 |
| 1 试验材料 | 第85-86页 |
| ·病毒、抗体和细胞 | 第85页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第85-86页 |
| ·细胞固定液 | 第86页 |
| ·封片剂 | 第86页 |
| ·主要仪器和用品 | 第86页 |
| 2 试验方法 | 第86-89页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL51蛋白细胞内的定位 | 第86-87页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL51蛋白细胞内的定位方法的建立 | 第86页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL51蛋白的细胞内定位方法的条件优化 | 第86-87页 |
| ·特异性检测 | 第87页 |
| ·免疫荧光检测结果判定 | 第87页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL51蛋白的细胞内定位的动态监测 | 第87页 |
| ·胶体金免疫电镜法检测DPV UL51蛋白的亚细胞定位 | 第87-89页 |
| ·胶体金免疫电镜法检测DPV UL51蛋白的亚细胞定位方法的建立 | 第87-88页 |
| ·胶体金免疫电镜法检测DPV UL51蛋白亚细胞定位方法的条件优化 | 第88页 |
| ·特异性试验 | 第88页 |
| ·胶体金免疫电镜法检测结果判定 | 第88页 |
| ·胶体金免疫电镜法检测DPV UL51蛋白在病毒感染细胞中的亚细胞定位的动态监测 | 第88-89页 |
| 3 结果 | 第89-94页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL51蛋白细胞内的定位 | 第89-92页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL51蛋白的细胞内定位方法的建立及优化 | 第89-90页 |
| ·特异性试验 | 第90页 |
| ·间接免疫荧光法检测UL51蛋白在DPV感染细胞中的定位动态 | 第90-92页 |
| ·胶体金免疫电镜法检测DPV UL51蛋白的亚细胞定位 | 第92-94页 |
| ·胶体金免疫电镜法检测DPV UL51蛋白的亚细胞定位方法的建立及优化 | 第92-93页 |
| ·特异性试验 | 第93页 |
| ·胶体金免疫电镜法检测DPV UL51蛋白在DPV病毒感染的细胞中的亚细胞定位动态 | 第93-94页 |
| 4 讨论 | 第94-96页 |
| ·特定蛋白在细胞定位的方法简介 | 第94-95页 |
| ·DPV UL51基因表达产物在宿主细胞定位与病毒增殖的关系分析 | 第95页 |
| ·疱疹病毒UL51蛋白的亚细胞定位与其功能的关系 | 第95-96页 |
| 5 小结 | 第96页 |
| Abstract | 第96-97页 |
| 第六章 用免疫组化方法检测DPV UL51蛋白在人工感染鸭组织中的定位和动态分布 | 第97-123页 |
| 摘要 | 第97-98页 |
| 1. 试验材料 | 第98-99页 |
| ·毒株和抗体 | 第98页 |
| ·试验动物 | 第98页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第98页 |
| ·组织固定、脱水和包埋 | 第98页 |
| ·所需主要溶液的配置 | 第98页 |
| ·免疫酶组化SP法所需试剂 | 第98页 |
| ·免疫荧光所需试剂 | 第98页 |
| ·主要仪器设备 | 第98-99页 |
| 2. 试验方法 | 第99-102页 |
| ·人工感染动物试验 | 第99页 |
| ·试验分组 | 第99页 |
| ·人工感染及样品的采集、固定、包埋和切片 | 第99页 |
| ·免疫酶组织化学检测DPV UL51蛋白组织定位方法的建立及优化 | 第99-101页 |
| ·免疫酶组织化学检测DPV UL51蛋白组织定位方法的建立 | 第99-100页 |
| ·免疫酶组织化学检测DPV UL51蛋白组织定位条件的优化 | 第100页 |
| ·特异性试验 | 第100页 |
| ·免疫酶组织化学法的检测结果判定 | 第100-101页 |
| ·免疫酶组织化学检测DPV UL51蛋白在人工感染鸭各组织中的定位和动态分布 | 第101页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL51蛋白组织定位方法的建立与优化 | 第101-102页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL51蛋白组织定位方法的建立 | 第101页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL51蛋白组织定位条件的优化 | 第101页 |
| ·特异性试验 | 第101-102页 |
| ·免疫荧光检测结果判定 | 第102页 |
| ·间接免疫荧光检测石蜡切片中DPV UL51蛋白在人工感染鸭各组织中的定位和动态分布 | 第102页 |
| 3. 试验结果 | 第102-118页 |
| ·人工感染DP强毒后鸭的临床症状及大体解剖病理变化 | 第102-104页 |
| ·免疫酶组织化学检测DPV UL51蛋白在鸭组织中的定位与分布 | 第104-111页 |
| ·免疫酶组化检测DPV UL51蛋白组织定位方法的优化结果 | 第104页 |
| ·异性试验 | 第104页 |
| ·免疫酶组织化学检测DPV UL51蛋白在人工感染鸭各组织中的定位和动态分布结果 | 第104-111页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL51蛋白在鸭组织中的定位与分布 | 第111-118页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL51蛋白组织定位方法的优化结果 | 第111页 |
| ·异性试验 | 第111页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL51蛋白在人工感染鸭各组织中的定位和动态分布结果 | 第111-118页 |
| 4. 讨论 | 第118-122页 |
| ·免疫酶组化和间接免疫荧光检测DPV UL51蛋白的定位方法的建立与优化 | 第118-120页 |
| ·免疫酶组化法检测DPV UL51蛋白的定位方法的建立与优化 | 第118-119页 |
| ·间接免疫荧光法检测DPV UL51蛋白的定位方法的建立与优化 | 第119-120页 |
| ·免疫酶组化和间接免疫荧光检测DPV UL51蛋白在人工感染鸭各组织中的定位与分布结果及二者的比较 | 第120-122页 |
| ·免疫酶组化法检测DPV UL51蛋白在人工感染鸭各组织中的定位与分布结果 | 第120-121页 |
| ·间接免疫荧光法检测DPV UL51蛋白在人工感染鸭各组织中的定位与分布结果 | 第121-122页 |
| ·不同方法检测DPV UL51蛋白在人工感染鸭体内的定位及分布规律比较 | 第122页 |
| 5. 小结 | 第122页 |
| Abstract | 第122-123页 |
| 第七章 基于重组UL51蛋白的间接ELISA法和胶体金免疫层析试纸条法检测鸭瘟病毒抗体的研究和应用 | 第123-140页 |
| 摘要 | 第123-124页 |
| 1 试验材料 | 第124-125页 |
| ·菌株、毒株和血清 | 第124页 |
| ·主要试剂 | 第124页 |
| ·ELISA相关溶液 | 第124页 |
| ·主要仪器及用品 | 第124-125页 |
| 2 试验方法 | 第125-129页 |
| ·重组UL51蛋白的大量制备和纯化 | 第125页 |
| ·菌体发酵培养 | 第125页 |
| ·重组ULL51蛋白的包涵体洗涤法大量纯化 | 第125页 |
| ·重组UL51蛋白的复性和检测 | 第125页 |
| ·UL51-ELISA法检测DPV抗体方法的建立 | 第125-127页 |
| ·最佳抗原包被浓度的确定 | 第125-126页 |
| ·待检血清和酶标二抗最佳稀释度的确定 | 第126页 |
| ·UL51-ELISA方法的检测程序 | 第126页 |
| ·UL51-ELISA阴阳性临界值的确定 | 第126页 |
| ·敏感性试验 | 第126页 |
| ·特异性试验 | 第126页 |
| ·重复性试验 | 第126-127页 |
| ·UL51-ICS法检测DPV抗体方法的建立 | 第127-129页 |
| ·ICS的组装 | 第127页 |
| ·UL51-ICS法的原理和结果判定 | 第127-128页 |
| ·UL51-ICS法的最佳试验条件的优化 | 第128-129页 |
| ·敏感性试验 | 第129页 |
| ·特异性试验 | 第129页 |
| ·重复性试验 | 第129页 |
| ·稳定性试验 | 第129页 |
| ·UL51-ELISA法和UL51-ICS法检测DPV抗体的应用 | 第129页 |
| 3 结果 | 第129-135页 |
| ·纯化的重组UL51蛋白的检测结果 | 第129-130页 |
| ·UL51-ELISA法的建立 | 第130-133页 |
| ·最佳抗原包被浓度确定的结果 | 第130页 |
| ·待检血清和酶标抗体最适度的确定 | 第130-131页 |
| ·ELISA阴阳性临界值的确定 | 第131-132页 |
| ·敏感性试验 | 第132页 |
| ·特异性试验结果 | 第132-133页 |
| ·重复性试验结果 | 第133页 |
| ·UL51-ICS方法的建立 | 第133-135页 |
| ·UL51-ICS法检测DPV抗体法的条件优化 | 第133-134页 |
| ·敏感性试验结果 | 第134页 |
| ·特异性试验结果 | 第134-135页 |
| ·重复性试验结果 | 第135页 |
| ·稳定性试验结果 | 第135页 |
| ·地方血清样品检测结果 | 第135页 |
| 4 讨论 | 第135-138页 |
| ·重组蛋白的优点及应用 | 第135-136页 |
| ·UL51-ELISA法的建立与优化 | 第136-137页 |
| ·UL51-ICS方法的建立与优化 | 第137-138页 |
| ·UL51-ELISA法、UL51-ICS法、DPV-ELISA法和NT法的比较 | 第138页 |
| 5 小结 | 第138-139页 |
| Abstract | 第139-140页 |
| 第八章 基于抗重组UL51蛋白抗体的抗原捕获ELISA法和胶体金免疫层析试纸条法检测DPV的研究和应用 | 第140-156页 |
| 摘要 | 第140页 |
| 1 试验材料 | 第140-141页 |
| ·蛋白、毒株和泄殖腔棉拭纸 | 第140-141页 |
| ·实验动物 | 第141页 |
| ·主要试剂 | 第141页 |
| ·主要仪器及用品 | 第141页 |
| 2 试验方法 | 第141-146页 |
| ·抗重组UL51蛋白多克隆抗体的制备和纯化 | 第141-142页 |
| ·兔抗重组UL51蛋白多克隆抗体的制备和纯化 | 第141页 |
| ·鼠抗重组UL51蛋白多克隆抗体的制备、纯化和胶体金标记 | 第141-142页 |
| ·样品的处理 | 第142页 |
| ·细胞培养液、鸭胚尿囊液或菌体培养液的处理 | 第142页 |
| ·泄殖腔棉拭子样品的处理 | 第142页 |
| ·基于抗重组UL51蛋白抗体的AC-ELISA法检测DPV方法的建立 | 第142-143页 |
| ·最佳鼠抗重组UL51蛋白抗体IgG和兔抗重组UL51蛋白抗体IgG工作浓度的确定 | 第142-143页 |
| ·酶标抗体最适浓度的确定 | 第143页 |
| ·阴阳性临界值的确定 | 第143页 |
| ·敏感性试验 | 第143页 |
| ·灵敏度试验 | 第143页 |
| ·重复性试验 | 第143页 |
| ·基于抗重组UL51蛋白抗体的ICS法的建立 | 第143-146页 |
| ·胶体金标记的兔抗重组UL51蛋白抗体的制备 | 第143-144页 |
| ·ICS的组装 | 第144页 |
| ·ICS法的原理和结果判定 | 第144-145页 |
| ·试纸条最佳试验条件的优化 | 第145页 |
| ·敏感性试验 | 第145页 |
| ·特异性试验 | 第145页 |
| ·重复性试验 | 第145页 |
| ·稳定性试验 | 第145-146页 |
| ·基于抗重组UL51蛋白抗体的AC-ELISA法和ICS法检测DPV的应用 | 第146页 |
| 3 结果 | 第146-152页 |
| ·纯化的重组UL51蛋白抗体的检测结果 | 第146页 |
| ·基于抗重组UL51蛋白抗体的AC-ELISA方法的建立 | 第146-150页 |
| ·鼠抗重组UL51蛋白抗体IgG和兔抗重组UL51蛋白抗体IgG最佳工作浓度确定的结果 | 第146-147页 |
| ·酶标抗体最适浓度的确定结果 | 第147页 |
| ·阴阳性临界值的确定结果 | 第147-148页 |
| ·特异性试验 | 第148页 |
| ·敏感性检测结果 | 第148-149页 |
| ·重复性试验结果 | 第149-150页 |
| ·基于抗重组UL51蛋白抗体的ICS法的建立 | 第150-151页 |
| ·基于抗重组UL51蛋白抗体的ICS法的条件优化 | 第150页 |
| ·敏感性试验结果 | 第150页 |
| ·特异性试验 | 第150-151页 |
| ·重复性试验结果 | 第151页 |
| ·稳定性试验结果 | 第151页 |
| ·基于抗重组UL51蛋白抗体的AC-ELISA法和ICS法检测DPV的应用 | 第151-152页 |
| 4 讨论 | 第152-154页 |
| ·样品处理方法的选择 | 第152页 |
| ·基于抗重组UL51蛋白抗体的抗原捕获ELISA法的建立与优化 | 第152页 |
| ·基于抗重组UL51蛋白抗体的ICS方法的建立与优化 | 第152-154页 |
| ·基于抗重组UL51蛋白抗体的AC-ELISA法、ICS法和常规PCR法的比较 | 第154页 |
| 5 小结 | 第154-155页 |
| Abstract | 第155-156页 |
| 第九章 鸭瘟病毒UL51基因真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的瞬时转录和表达特性 | 第156-171页 |
| 摘要 | 第156页 |
| 1 试验材料 | 第156-158页 |
| ·病毒、菌株、载体、细胞和抗体 | 第156-157页 |
| ·主要试剂 | 第157-158页 |
| ·主要仪器和用品 | 第158页 |
| 2 试验方法 | 第158-164页 |
| ·DPV UL51基因的克隆 | 第158-160页 |
| ·引物设计 | 第158页 |
| ·DPV基因组DNA的提取 | 第158页 |
| ·PCR扩增DPV UL51基因 | 第158-159页 |
| ·UL51基因PCR产物的回收 | 第159页 |
| ·纯化的UL51基因与pMD18-T的连接 | 第159页 |
| ·DH5a感受态细胞的制备 | 第159页 |
| ·转化感受态细胞 | 第159页 |
| ·质粒的抽提 | 第159页 |
| ·重组质粒的PCR和酶切鉴定 | 第159页 |
| ·UL51基因序列测定 | 第159-160页 |
| ·真核表达质粒pcDNA3.1-UL51的构建与鉴定 | 第160-161页 |
| ·目的片段的酶切与连接 | 第160页 |
| ·重组质粒的转化 | 第160页 |
| ·重组质粒的酶切和PCR鉴定 | 第160-161页 |
| ·UL51基因在COS-7细胞中的瞬时转录和表达特性分析 | 第161-164页 |
| ·重组真核表达载体pcDNA3.1-UL51转染COS-7细胞 | 第161页 |
| ·荧光定量RT-PCR方法检测UL51基因在COS-7细胞中的瞬时转录 | 第161-163页 |
| ·Western blotting检测UL51基因在COS-7细胞中的瞬时表达 | 第163页 |
| ·间接免疫荧光法检测UL51基因表达产物在COS-7细胞中的定位 | 第163-164页 |
| 3 试验结果 | 第164-168页 |
| ·DPV UL51基因的扩增、T-克隆与鉴定结果 | 第164-165页 |
| ·UL51基因的PCR扩增结果 | 第164页 |
| ·UL51基因T克隆鉴定结果 | 第164-165页 |
| ·真核表达载体pcDNA3.1-UL51的构建与酶切鉴定 | 第165页 |
| ·UL51基因在COS-7细胞中的转录情况 | 第165-166页 |
| ·RNA完整性及纯度分析 | 第165-166页 |
| ·UL51基因在COS-7细胞中的相对转录量分析 | 第166页 |
| ·UL51基因在COS-7细胞中的表达情况 | 第166-167页 |
| ·细胞蛋白的提取及SDS-PAGE检测 | 第166-167页 |
| ·UL51基因表达产物在在COS-7细胞中的表达时相分析 | 第167页 |
| ·UL51基因表达产物在COS-7细胞中的定位 | 第167-168页 |
| 4 讨论 | 第168-170页 |
| ·真核表达载体、转染试剂、宿主细胞的选择 | 第168-169页 |
| ·UL51基因转录和表达产物的检测 | 第169-170页 |
| 5 小结 | 第170页 |
| Abstract | 第170-171页 |
| 结论 | 第171-173页 |
| 参考文献 | 第173-186页 |
| 致谢 | 第186-187页 |
| 作者简介以及攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第187-188页 |
