| 目录 | 第1-12页 |
| 缩略语与符号一览表 | 第12-13页 |
| 中文摘要 | 第13-16页 |
| ABSTRACTS | 第16-20页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-38页 |
| 第一节 纤维素的来源及结构 | 第20-23页 |
| 1 纤维素的来源 | 第21页 |
| 2 纤维素的结构 | 第21-23页 |
| 第二节 纤维素酶的特性与应用 | 第23-30页 |
| 1 纤维素酶的分类 | 第23-24页 |
| 2 纤维素酶的结构 | 第24-25页 |
| ·催化结构域 | 第24页 |
| ·连接区 | 第24页 |
| ·纤维素结合域 | 第24-25页 |
| 3 纤维素酶的热稳定性 | 第25-27页 |
| 4 降解纤维素类物质的嗜热微生物 | 第27-28页 |
| 5 纤维素酶的应用研究 | 第28-30页 |
| ·纤维素酶在饲料上的应用 | 第28-29页 |
| ·纤维素酶在食品工业上的应用 | 第29页 |
| ·纤维素酶在洗涤工业上的应用 | 第29-30页 |
| ·纤维素酶在纺织工业上的应用 | 第30页 |
| 第三节 分泌高活性纤维素酶的瘤胃真菌 | 第30-34页 |
| 1 瘤胃厌氧真菌的分类 | 第30页 |
| 2 主要瘤胃厌氧真菌所产纤维素酶 | 第30-34页 |
| ·N.frontalis | 第30-31页 |
| ·N.patriciarum | 第31-32页 |
| ·Orpinomyces PC-2 | 第32-33页 |
| ·O.joyonii | 第33页 |
| ·P.rhizinflata | 第33-34页 |
| ·C.communis | 第34页 |
| 第四节 纤维素酶的基因调控和重组表达 | 第34-36页 |
| 1 纤维素酶基因在大肠杆菌中表达 | 第34-35页 |
| 2 纤维素酶基因在酵母中表达 | 第35页 |
| 3 纤维素酶基因在家蚕生物反应器中表达 | 第35-36页 |
| 4 纤维素酶基因在动植物中表达 | 第36页 |
| 第五节 本研究的目的意义与主要内容 | 第36-38页 |
| 1 目的意义 | 第36-37页 |
| 2 主要内容 | 第37-38页 |
| 第二章 里氏木霉内切葡聚糖酶Ⅱ基因在BmNPV/Bac-to-Bac快速基因表达系统中的探索性表达 | 第38-73页 |
| 第一节 里氏木霉内切葡聚糖酶Ⅱ基因的克隆及序列分析 | 第39-53页 |
| 1 克隆策略 | 第39-40页 |
| 2 试验材料 | 第40-42页 |
| 3 试验方法 | 第42-46页 |
| ·里氏木霉的纯培养 | 第42页 |
| ·真菌总RNA的提取 | 第42页 |
| ·RT-PCR | 第42-43页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第43-44页 |
| ·egl2与T载体连接 | 第44页 |
| ·感受态细胞E.coli DH5α的制备与转化 | 第44-45页 |
| ·重组质粒的抽提与鉴定 | 第45-46页 |
| ·里氏木霉内切葡聚糖酶Ⅱ基因egl2的序列测定及分析 | 第46页 |
| 4 试验结果 | 第46-53页 |
| ·里氏木霉内切葡聚糖酶Ⅱ基因egl2的克隆 | 第46页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·egl2基因序列分析 | 第47-53页 |
| 第二节 里氏木霉内切葡聚糖酶Ⅱ基因的探索性表达 | 第53-73页 |
| 1 表达策略 | 第53页 |
| 2 试验材料 | 第53-57页 |
| ·试剂及主要仪器 | 第53-54页 |
| ·实验动物及细胞 | 第54页 |
| ·有关试剂的配制 | 第54-57页 |
| 3 试验方法 | 第57-65页 |
| ·pGEM-egl2重组质粒的酶切 | 第57-58页 |
| ·pFastBacHTc空载体的酶切 | 第58页 |
| ·DNA的连接与转化 | 第58页 |
| ·重组质粒的抽提与鉴定 | 第58页 |
| ·感受态细胞DH10BmBac E.coli的制备与转座 | 第58-59页 |
| ·重组Bacmid DNA的抽提与鉴定 | 第59-60页 |
| ·Bacmid DNA转染 | 第60-61页 |
| ·egl2基因在家蚕培养细胞和家蚕幼虫中的表达 | 第61页 |
| ·表达产物的分析与鉴定 | 第61-63页 |
| ·重组EGII蛋白的纯化与鉴定 | 第63-64页 |
| ·纯化rEGII蛋白的去糖基化反应 | 第64页 |
| ·内切葡聚糖酶活性测定 | 第64-65页 |
| 4 试验结果 | 第65-71页 |
| ·供体质粒的酶切鉴定 | 第65-66页 |
| ·重组Bacmid DNA的PCR鉴定 | 第66页 |
| ·重组Bacmid DNA转染BmN培养细胞和感染家蚕的情况 | 第66-67页 |
| ·重组EGII蛋白在BmN细胞内的表达时相分析 | 第67-68页 |
| ·重组EGII蛋白的纯化及去糖基化反应 | 第68-70页 |
| ·重组EGII蛋白的内切葡聚糖酶活性 | 第70-71页 |
| 5 讨论与分析 | 第71-73页 |
| 第三章 杂合内切葡聚糖酶基因与亲本酶基因在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第73-101页 |
| 第一节 杂合内切葡聚糖酶基因的分子设计及合成 | 第75-83页 |
| 1 分子设计 | 第75-80页 |
| ·高酶活基因材料 | 第75-77页 |
| ·耐热基因材料 | 第77-80页 |
| 2 杂合酶CelcdT'C'基因和亲本酶CelcdN'C'基因的获得 | 第80-83页 |
| ·CelcdT'C'全基因的合成 | 第80-81页 |
| ·CelcdN'C'全基因的合成 | 第81-83页 |
| 第二节 CelcdT'C'基因和CelcdN'C'基因在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第83-101页 |
| 1 表达策略 | 第83-85页 |
| ·CelcdT'C'基因的表达策略 | 第83-84页 |
| ·CelcdN'C'基因的表达策略 | 第84-85页 |
| 2 试验材料 | 第85页 |
| 3 试验方法 | 第85-89页 |
| ·pUC57-CelcdT'C'/CelcdN'C'重组质粒的双酶切 | 第85-86页 |
| ·pET-30a(+)空载体的双酶切 | 第86页 |
| ·CelcdT'C'/CelcdN'C'与pET-30a(+)的连接 | 第86页 |
| ·感受态细胞E.coli BL21(DE3)的制备与转化 | 第86-87页 |
| ·重组质粒的抽提与阳性转化子的筛选 | 第87页 |
| ·阳性表达子的筛选 | 第87页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE及Western blot分析 | 第87-88页 |
| ·表达产物的纯化 | 第88-89页 |
| ·内切葡聚糖酶酶学性质研究 | 第89页 |
| ·内切葡聚糖酶活性测定 | 第89页 |
| 4 试验结果 | 第89-99页 |
| ·重组质粒pUC57-CelcdT'C'和pUC57-CelcdN'C'的双酶切 | 第89-90页 |
| ·pET-30a(+)空载体的双酶切 | 第90-91页 |
| ·阳性转化子的筛选 | 第91-92页 |
| ·阳性表达子的筛选 | 第92-94页 |
| ·SDS-PAGE分析和Western blot鉴定 | 第94-95页 |
| ·表达产物的纯化 | 第95-96页 |
| ·内切葡聚糖酶酶学性质研究 | 第96-99页 |
| ·内切葡聚糖酶活性测定 | 第99页 |
| 5 讨论与分析 | 第99-101页 |
| 第四章 杂合内切葡聚糖酶基因与亲本酶基因在家蚕蛹中的表达及大鼠饲喂效果研究 | 第101-126页 |
| 第一节 CelcdT'C'基因和CelcdN'C'基因在家蚕蛹中表达 | 第102-118页 |
| 1 表达策略 | 第102-103页 |
| 2 试验材料 | 第103页 |
| ·试剂来源及主要仪器 | 第103页 |
| ·有关试剂的配制 | 第103页 |
| 3 试验方法 | 第103-107页 |
| ·pUC57-CelcdT'C'/CelcdN'C'重组质粒的双酶切 | 第103-104页 |
| ·pFastBacHTb空载体的双酶切 | 第104页 |
| ·DNA的连接与转化 | 第104页 |
| ·重组质粒的抽提与鉴定 | 第104页 |
| ·感受态细胞DH10BmBac E.coli的制备与转座 | 第104页 |
| ·重组Bacmid DNA的抽提与鉴定 | 第104-106页 |
| ·Bacmid DNA转染 | 第106页 |
| ·CelcdT'C'基因和CelcdN'C'基因在家蚕培养细胞和家蚕蛹中的表达 | 第106页 |
| ·重组CelcdT'C'/CelcdN'C'蛋白的Western blot鉴定分析 | 第106页 |
| ·重组CelcdT'C'/CelcdN'C'蛋白的内切葡聚糖酶活性测定 | 第106-107页 |
| ·重组CelcdT'C'/CelcdN'C'蛋白的部分酶学性质研究 | 第107页 |
| 4 试验结果 | 第107-116页 |
| ·重组质粒pUC57-CelcdT'C'和pUC57-CelcdN'C'的双酶切 | 第107页 |
| ·pFastBacHTb空载体的双酶切 | 第107-108页 |
| ·供体质粒的酶切鉴定 | 第108-109页 |
| ·重组Bacmid DNA的PCR鉴定 | 第109-110页 |
| ·重组Bacmid DNA转染BmN培养细胞和感染家蚕蚕蛹的情况 | 第110页 |
| ·重组蛋白在BmN细胞内的表达时相Western blot检测 | 第110-112页 |
| ·家蚕蛹表达产物的Western blot鉴定 | 第112-113页 |
| ·重组蛋白的内切葡聚糖酶活性 | 第113-115页 |
| ·重组蛋白的部分酶学性质研究 | 第115-116页 |
| 5 讨论与分析 | 第116-118页 |
| 第二节 大鼠饲喂效果试验 | 第118-126页 |
| 1 材料与方法 | 第118-120页 |
| 2 结果与分析 | 第120-124页 |
| 3 讨论 | 第124-126页 |
| 第五章 提示、创新点及后续研究展望 | 第126-127页 |
| 1 提示 | 第126页 |
| 2 创新点 | 第126页 |
| 3 后续研究展望 | 第126-127页 |
| 参考文献 | 第127-139页 |
| 附录 | 第139-143页 |
| 博士期间发表论文 | 第143-144页 |
| 致谢 | 第144页 |
