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耐辐射球菌recQ及相关基因的生化和突变分析

致谢第1-8页
摘要第8-10页
Abstract第10-20页
第1章 文献综述第20-45页
   ·耐辐射球菌研究进展第20-31页
     ·形态特征第20页
     ·名称起源第20-22页
     ·基因组测序第22页
     ·耐辐射球菌的DNA损伤抗性第22-31页
   ·突变分析研究进展第31-34页
     ·检测突变子第31-32页
     ·突变率和突变谱测定第32-34页
   ·课题研究的目的和意义第34页
   ·参考文献第34-45页
第2章 耐辐射球菌RecQ蛋白的体外活性研究第45-64页
   ·引言第45-47页
   ·材料与方法第47-50页
     ·菌种,质粒和培养基第47页
     ·RecQ突变株的构建第47-48页
     ·DR1289补偿质粒的构建第48页
     ·MQ和MQ1-5的表型实验第48-49页
     ·Western blot分析第49页
     ·表达质粒构建和蛋白纯化第49页
     ·解螺旋酶(Helicase)活性测试第49-50页
     ·ATPase活性测试实验第50页
   ·结果第50-57页
     ·MQ及补偿株的表型第50-52页
     ·DR1289解旋酶活性的生化分析第52-55页
     ·HRDC结构域截短体和D.radiodurans SSB蛋白对DR1289解旋酶活性的作用第55-57页
     ·HRDC结构域也提高Dr1289的依赖于DNA的ATPase活性第57页
   ·讨论第57-59页
   ·小结第59-60页
   ·参考文献第60-64页
第3章 耐辐射球菌单链结合蛋白及截短体的生化分析第64-81页
   ·引言第64-65页
   ·材料与方法第65-68页
     ·菌种,培养基和抗生素第65页
     ·D.radiodurans SSB蛋白及其截短体的表达和纯化第65页
     ·凝胶过滤法测定DrSSB及其截短体的自然分子量第65-66页
     ·蛋白序列分析第66页
     ·用于凝胶迁移滞后实验(EMSA)和荧光共振能量转移(FRET)的寡聚核苷酸第66-67页
     ·EMSA第67页
     ·FRET第67-68页
   ·结果第68-75页
     ·DrSSB及截短体的表达纯化和比对第68页
     ·DrSSB及截短体的亚基组织第68页
     ·3'-overhang,5'-overhang和钝端双链DNA底物的EMSA实验第68-72页
     ·使用FRET检测ssDNA结合活性第72页
     ·单链DNA长链的EMSA实验第72-75页
     ·气泡结构的EMSA实验第75页
   ·讨论第75-77页
   ·小结第77-78页
   ·参考文献第78-81页
第4章 耐辐射球菌recQ参与紫外损伤修复途径第81-94页
   ·引言第81-82页
   ·材料与方法第82-84页
     ·菌株与质粒第82-83页
     ·突变株构建第83页
     ·突变率的测定第83页
     ·DNA分离和测序第83-84页
   ·结果与分析第84-88页
     ·突变频率和突变率第84-85页
     ·四个菌种中利福平抗性突变位点分布第85页
     ·野生株中的自发突变第85-86页
     ·D.radiodurans突变株的自发突变热点第86-87页
     ·rpoB中菌种特异性的突变热点第87-88页
   ·讨论第88-90页
   ·小结第90页
   ·参考文献第90-94页
第5章 不同利福平浓度下耐辐射球菌的自发突变率与突变谱研究第94-105页
   ·引言第94-95页
   ·材料与方法第95-96页
     ·菌种,培养基,和抗生素第95页
     ·突变频率和突变率的测定第95页
     ·DNA的分离和测序第95页
     ·耐辐射球菌最小抑菌浓度(MIC)的测定第95-96页
   ·结果与分析第96-99页
     ·突变频率和突变速率第96页
     ·不同利福平浓度下的Rif突变位点分析第96-98页
     ·rpoB的利福平浓度特异性突变热点第98页
     ·耐辐射球菌野生株和Rif突变株的MIC值的测定第98-99页
   ·讨论第99-102页
   ·小结第102页
   ·参考文献第102-105页
第6章 耐辐射球菌rpoB在基因调控中的作用第105-121页
   ·引言第105-106页
   ·材料与方法第106-108页
     ·菌种,培养基和抗生素第106页
     ·生长特性测定第106页
     ·RNA提取,探针制备,芯片杂交和数据分析第106-107页
     ·实时定量PCR第107页
     ·Motif分析第107页
     ·体内活性氧(ROS)水平测定第107-108页
   ·结果第108-115页
     ·突变株生长较野生株迟缓第108-109页
     ·9-bp-deletion rpoB突变株的表达谱与野生株差异较大第109-115页
   ·讨论第115-117页
   ·小结第117页
   ·参考文献第117-121页
结论与展望第121-123页
个人简历第123-125页
学位期间发表的学术论文(含待发表)第125页

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