致谢 | 第1-8页 |
摘要 | 第8-10页 |
Abstract | 第10-20页 |
第1章 文献综述 | 第20-45页 |
·耐辐射球菌研究进展 | 第20-31页 |
·形态特征 | 第20页 |
·名称起源 | 第20-22页 |
·基因组测序 | 第22页 |
·耐辐射球菌的DNA损伤抗性 | 第22-31页 |
·突变分析研究进展 | 第31-34页 |
·检测突变子 | 第31-32页 |
·突变率和突变谱测定 | 第32-34页 |
·课题研究的目的和意义 | 第34页 |
·参考文献 | 第34-45页 |
第2章 耐辐射球菌RecQ蛋白的体外活性研究 | 第45-64页 |
·引言 | 第45-47页 |
·材料与方法 | 第47-50页 |
·菌种,质粒和培养基 | 第47页 |
·RecQ突变株的构建 | 第47-48页 |
·DR1289补偿质粒的构建 | 第48页 |
·MQ和MQ1-5的表型实验 | 第48-49页 |
·Western blot分析 | 第49页 |
·表达质粒构建和蛋白纯化 | 第49页 |
·解螺旋酶(Helicase)活性测试 | 第49-50页 |
·ATPase活性测试实验 | 第50页 |
·结果 | 第50-57页 |
·MQ及补偿株的表型 | 第50-52页 |
·DR1289解旋酶活性的生化分析 | 第52-55页 |
·HRDC结构域截短体和D.radiodurans SSB蛋白对DR1289解旋酶活性的作用 | 第55-57页 |
·HRDC结构域也提高Dr1289的依赖于DNA的ATPase活性 | 第57页 |
·讨论 | 第57-59页 |
·小结 | 第59-60页 |
·参考文献 | 第60-64页 |
第3章 耐辐射球菌单链结合蛋白及截短体的生化分析 | 第64-81页 |
·引言 | 第64-65页 |
·材料与方法 | 第65-68页 |
·菌种,培养基和抗生素 | 第65页 |
·D.radiodurans SSB蛋白及其截短体的表达和纯化 | 第65页 |
·凝胶过滤法测定DrSSB及其截短体的自然分子量 | 第65-66页 |
·蛋白序列分析 | 第66页 |
·用于凝胶迁移滞后实验(EMSA)和荧光共振能量转移(FRET)的寡聚核苷酸 | 第66-67页 |
·EMSA | 第67页 |
·FRET | 第67-68页 |
·结果 | 第68-75页 |
·DrSSB及截短体的表达纯化和比对 | 第68页 |
·DrSSB及截短体的亚基组织 | 第68页 |
·3'-overhang,5'-overhang和钝端双链DNA底物的EMSA实验 | 第68-72页 |
·使用FRET检测ssDNA结合活性 | 第72页 |
·单链DNA长链的EMSA实验 | 第72-75页 |
·气泡结构的EMSA实验 | 第75页 |
·讨论 | 第75-77页 |
·小结 | 第77-78页 |
·参考文献 | 第78-81页 |
第4章 耐辐射球菌recQ参与紫外损伤修复途径 | 第81-94页 |
·引言 | 第81-82页 |
·材料与方法 | 第82-84页 |
·菌株与质粒 | 第82-83页 |
·突变株构建 | 第83页 |
·突变率的测定 | 第83页 |
·DNA分离和测序 | 第83-84页 |
·结果与分析 | 第84-88页 |
·突变频率和突变率 | 第84-85页 |
·四个菌种中利福平抗性突变位点分布 | 第85页 |
·野生株中的自发突变 | 第85-86页 |
·D.radiodurans突变株的自发突变热点 | 第86-87页 |
·rpoB中菌种特异性的突变热点 | 第87-88页 |
·讨论 | 第88-90页 |
·小结 | 第90页 |
·参考文献 | 第90-94页 |
第5章 不同利福平浓度下耐辐射球菌的自发突变率与突变谱研究 | 第94-105页 |
·引言 | 第94-95页 |
·材料与方法 | 第95-96页 |
·菌种,培养基,和抗生素 | 第95页 |
·突变频率和突变率的测定 | 第95页 |
·DNA的分离和测序 | 第95页 |
·耐辐射球菌最小抑菌浓度(MIC)的测定 | 第95-96页 |
·结果与分析 | 第96-99页 |
·突变频率和突变速率 | 第96页 |
·不同利福平浓度下的Rif突变位点分析 | 第96-98页 |
·rpoB的利福平浓度特异性突变热点 | 第98页 |
·耐辐射球菌野生株和Rif突变株的MIC值的测定 | 第98-99页 |
·讨论 | 第99-102页 |
·小结 | 第102页 |
·参考文献 | 第102-105页 |
第6章 耐辐射球菌rpoB在基因调控中的作用 | 第105-121页 |
·引言 | 第105-106页 |
·材料与方法 | 第106-108页 |
·菌种,培养基和抗生素 | 第106页 |
·生长特性测定 | 第106页 |
·RNA提取,探针制备,芯片杂交和数据分析 | 第106-107页 |
·实时定量PCR | 第107页 |
·Motif分析 | 第107页 |
·体内活性氧(ROS)水平测定 | 第107-108页 |
·结果 | 第108-115页 |
·突变株生长较野生株迟缓 | 第108-109页 |
·9-bp-deletion rpoB突变株的表达谱与野生株差异较大 | 第109-115页 |
·讨论 | 第115-117页 |
·小结 | 第117页 |
·参考文献 | 第117-121页 |
结论与展望 | 第121-123页 |
个人简历 | 第123-125页 |
学位期间发表的学术论文(含待发表) | 第125页 |