| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 第1章 前言 | 第10-24页 |
| 1.1 DNA甲基化研究进展 | 第10-15页 |
| 1.1.1 DNA甲基化的建立 | 第10-11页 |
| 1.1.2 DNA甲基化的功能研究 | 第11-13页 |
| 1.1.3 基因印记和表观遗传 | 第13-15页 |
| 1.2 TET蛋白结构和催化功能 | 第15-18页 |
| 1.2.1 TET蛋白的种类与结构域 | 第15页 |
| 1.2.2 TET蛋白在染色质上的定位 | 第15-17页 |
| 1.2.3 TET蛋白介导主动去甲基化的机制 | 第17-18页 |
| 1.3 TET蛋白的生物学作用 | 第18-22页 |
| 1.3.1 TET蛋白与转录调控 | 第18-20页 |
| 1.3.2 TET蛋白在个体发育中的作用 | 第20页 |
| 1.3.3 TET蛋白与基因印记 | 第20-22页 |
| 1.4 研究的目的和意义 | 第22页 |
| 1.5 本论文的研究方法 | 第22-24页 |
| 第2章 TET1蛋白亚型的鉴定 | 第24-41页 |
| 2.1 本章引论 | 第24页 |
| 2.2 材料与方法 | 第24-34页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.2.2 测序数据可视化 | 第25-26页 |
| 2.2.3 小鼠胚胎干细胞传代 | 第26页 |
| 2.2.4 神经细胞分化实验 | 第26-27页 |
| 2.2.5 组蛋白染色质免疫共沉淀实验 | 第27-28页 |
| 2.2.6 DNA测序文库的建立 | 第28-30页 |
| 2.2.7 RNA测序实验 | 第30页 |
| 2.2.8 CRISPR/Cas9介导的DNA编辑 | 第30-34页 |
| 2.2.9 蛋白过表达实验 | 第34页 |
| 2.3 结果与分析 | 第34-39页 |
| 2.3.1 TET1两种亚型的组织特异性表达 | 第34-35页 |
| 2.3.2 TET1两种亚型的表达受不同启动子调控 | 第35-38页 |
| 2.3.3 全长TET1表达受到胚胎干细胞转录因子的调控 | 第38-39页 |
| 2.4 本章小结 | 第39-41页 |
| 第3章 TET1蛋白N端的功能研究 | 第41-86页 |
| 3.1 本章引言 | 第41页 |
| 3.2 材料与方法 | 第41-60页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 3.2.2 TET蛋白突变体过表达质粒的构建 | 第42-43页 |
| 3.2.3 TET蛋白突变的胚胎干细胞系的构建 | 第43-44页 |
| 3.2.4 带FLAG标签的TET1蛋白ChIP实验 | 第44-45页 |
| 3.2.5 免疫荧光实验和统计 | 第45-46页 |
| 3.2.6 细胞可溶质和染色质蛋白的分离及鉴定 | 第46-47页 |
| 3.2.7 特异性表达TET1s的胚胎干细胞系的构建 | 第47-49页 |
| 3.2.8 5hmC免疫印迹实验 | 第49页 |
| 3.2.9 全基因组DNA重亚硫酸盐测序法 | 第49-53页 |
| 3.2.10 蛋白质免疫共沉淀实验 | 第53页 |
| 3.2.11 测序数据的处理和分析 | 第53-60页 |
| 3.3 结果与分析 | 第60-85页 |
| 3.3.1 TET1对靶位点的识别并不依赖于CXXC结构域 | 第60-65页 |
| 3.3.2 TET1的N端显著提升整体染色质亲和力 | 第65-70页 |
| 3.3.3 N端促进TET1介导的DNA甲基氧化和主动去甲基化进程 | 第70-72页 |
| 3.3.4 TET1介导的去甲基化不依赖于ChIP测序检测到的靶位点 | 第72-81页 |
| 3.3.5 TET1的N端通过增强OGT与DNA结合参与转录调控 | 第81-85页 |
| 3.4 本章小结 | 第85-86页 |
| 第4章 TET1亚型转换对小鼠基因印记的调控 | 第86-100页 |
| 4.1 本章引言 | 第86页 |
| 4.2 材料与方法 | 第86-91页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第86-87页 |
| 4.2.2 Tet1~(cs/cs)基因型小鼠模型构建 | 第87页 |
| 4.2.3 小鼠基因型鉴定 | 第87-88页 |
| 4.2.4 小鼠原始生殖细胞的的收集 | 第88页 |
| 4.2.5 少量细胞的转录组检测 | 第88-90页 |
| 4.2.6 少量细胞的全基因组DNA甲基化测序 | 第90页 |
| 4.2.7 胎鼠印记基因区域的DNA甲基化检测 | 第90-91页 |
| 4.3 结果与分析 | 第91-99页 |
| 4.3.1 仅能表达TET1s的小鼠出生率正常 | 第91-92页 |
| 4.3.2 仅能表达TET1s的小鼠基因印记不能正常清除 | 第92-96页 |
| 4.3.3 仅能表达TET1s的雄性小鼠子代发育出现缺陷 | 第96-97页 |
| 4.3.4 仅有TET1s表达的小鼠生殖基因表达异常 | 第97-99页 |
| 4.4 本章小结 | 第99-100页 |
| 第5章 结论与讨论 | 第100-105页 |
| 5.1 结论 | 第100-102页 |
| 5.2 讨论 | 第102-105页 |
| 参考文献 | 第105-112页 |
| 致谢 | 第112-114页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第114页 |
