| 致谢 | 第4-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-14页 |
| 1.1 禾谷类淀粉的生物合成 | 第9-11页 |
| 1.1.1 淀粉合成的相关酶 | 第9-11页 |
| 1.2 AGPase的研究进展 | 第11-14页 |
| 1.2.1 AGPase的组成形式及分布 | 第11页 |
| 1.2.2 AGPase调控机理的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2.3 基因工程提高禾本科中淀粉含量的研究 | 第12-14页 |
| 2 引言 | 第14页 |
| 3 材料与方法 | 第14-26页 |
| 3.1 实验材料 | 第14-16页 |
| 3.2 实验方法 | 第16-26页 |
| 3.2.1 总RNA的提取及质量检测 | 第16-17页 |
| 3.2.2 cDNA第一链的合成 | 第17-18页 |
| 3.2.3 AGPase四亚基的基因克隆及转录水平的分析 | 第18页 |
| 3.2.4 胞质型大亚基(LSUⅠ)重组质粒的构建及测序 | 第18-21页 |
| 3.2.4.1 目的片段的胶回收 | 第18-19页 |
| 3.2.4.2 胶回收产物与中间载体连接 | 第19页 |
| 3.2.4.3 连接产物转化大肠杆菌 | 第19页 |
| 3.2.4.4 提取重组质粒 | 第19-20页 |
| 3.2.4.5 重组质粒的PCR及酶切鉴定 | 第20-21页 |
| 3.2.4.6 重组质粒的测序 | 第21页 |
| 3.2.5 构建LSUI基因的过表达载体 | 第21页 |
| 3.2.6 花粉管通道法转化小麦 | 第21-22页 |
| 3.2.7 转基因小麦后代的检测 | 第22-26页 |
| 3.2.7.1 转基因小麦T_1代的PCR检测 | 第22页 |
| 3.2.7.2 转基因T_2代阳性植株的Southern杂交检测 | 第22-23页 |
| 3.2.7.3 转基因T_3代的qRT-PCR检测 | 第23-24页 |
| 3.2.7.4 转基因T_3代的AGPase酶活性测定 | 第24-25页 |
| 3.2.7.5 转基因T_3代的籽粒淀粉含量测定 | 第25页 |
| 3.2.7.6 转基因T_3代植株的粒重分析 | 第25-26页 |
| 4 结果与分析 | 第26-36页 |
| 4.1 两个小麦品种间淀粉积累速率及AGPase活性分析 | 第26-27页 |
| 4.2 小麦AGPase各亚基cDNA序列的克隆及转录水平比较 | 第27-28页 |
| 4.3 LSUI基因cDNA序列的克隆与表达分析 | 第28-31页 |
| 4.4 转基因后代的PCR检测及Southern杂交验证 | 第31-33页 |
| 4.4.1 转基因T_1代的分子检测 | 第31-32页 |
| 4.4.2 转基因T_2代的Southern杂交验证 | 第32-33页 |
| 4.5 T_3代转基因植株的qRT-PCR检测、AGPase活性及淀粉含量测定 | 第33-36页 |
| 4.5.1 转基因植株的qRT-PCR检测 | 第33页 |
| 4.5.2 转基因植株的AGPase活性及淀粉含量测定 | 第33-35页 |
| 4.5.3 T_3代转基因植株的粒重分析 | 第35-36页 |
| 5 结论与讨论 | 第36-38页 |
| 5.1 胞质型大亚基(LSUⅠ)可能是AGPase酶与淀粉合成速率的限制因子 | 第36页 |
| 5.2 过表达LSUⅠ基因能显著提高淀粉合成能力 | 第36-37页 |
| 5.3 本研究的创新点 | 第37页 |
| 5.4 下一步研究计划 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-44页 |
| ABSTRACT | 第44-45页 |
