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家蚕细小病毒样病毒(中国株)DNA聚合酶基因的克隆与表达

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-12页
第一章 绪论第12-34页
   ·细小病毒的研究第12-16页
     ·细小病毒的特征及分类第12-14页
     ·细小病毒的基因组特征第14页
     ·细小病毒的复制第14-16页
   ·浓核病毒的研究第16-21页
     ·浓核病毒的特征第16-17页
     ·浓核病毒的感染特性第17页
     ·浓核病毒的基因组结构第17-19页
     ·家蚕浓核病毒的特征第19-21页
   ·家蚕细小病毒样病毒的研究第21-27页
     ·家蚕细小病毒样病毒山梨株的研究第21-23页
     ·家蚕细小病毒样病毒中国株的研究第23-25页
     ·家蚕细小病毒样病毒VD1-ORF4编码DNA聚合酶的分析第25-26页
     ·家蚕细小病毒样病毒复制机制的推测第26-27页
   ·DNA聚合酶B家族的特征第27-29页
   ·外源基因表达系统第29-31页
     ·pET原核表达系统第29-30页
     ·杆状病毒表达系统第30-31页
   ·立题的目的意义第31页
   ·研究内容和技术路线第31-34页
     ·研究内容第31-33页
     ·技术路线第33-34页
第二章 家蚕细小病毒样病毒中国株DNA聚合酶基因主要功能域的原核表达载体的构建第34-45页
   ·实验材料第34-36页
     ·病毒、菌株与载体第34页
     ·主要实验仪器设备第34页
     ·工具酶及主要生化试剂第34-35页
     ·试剂的配制第35-36页
   ·实验方法第36-42页
     ·病毒基因组DNA的制备第36-37页
     ·VD1-ORF4/2163的克隆和鉴定第37-41页
     ·VD1-ORF4/2163原核表达载体的构建第41-42页
   ·结果第42-44页
     ·VD1-ORF4/2163的PCR扩增第42-43页
     ·重组克隆质粒的鉴定第43-44页
     ·重组表达质粒的鉴定第44页
   ·讨论与总结第44-45页
第三章 家蚕细小病毒样病毒中国株DNA聚合酶基因主要功能域的原核表达及抗体制备第45-56页
   ·实验材料第45-47页
     ·菌株第45页
     ·主要实验仪器设备第45页
     ·主要实验试剂第45-46页
     ·试剂的配制第46-47页
   ·实验方法第47-52页
     ·VD1-ORF4/2163基因片段在大肠杆菌中的表达及表达产物的鉴定第47-50页
     ·重组蛋白的纯化及多克隆抗体的制备第50-52页
   ·结果第52-54页
     ·表达产物的SDS-PAGE分析与Western blot检测第52页
     ·表达产物的质谱鉴定第52-53页
     ·多克隆抗体的制备与纯化第53-54页
   ·讨论与总结第54-56页
第四章 家蚕细小病毒样病毒中国株DNA聚合酶基因的真核表达第56-64页
   ·实验材料第56页
     ·质粒、菌株与细胞第56页
     ·主要实验试剂和药品第56页
   ·实验方法第56-60页
     ·VD1-ORF4的克隆第56-57页
     ·pFastBacHTb-VD1-ORF4转移载体的构建第57-58页
     ·重组Bacmid穿梭载体的构建第58页
     ·重组Bacmid的提取第58-59页
     ·重组Bacmid的PCR鉴定第59页
     ·重组杆状病毒的获得第59-60页
     ·重组蛋白的表达与鉴定第60页
   ·结果第60-63页
     ·VD1-ORF4的克隆与鉴定第60-61页
     ·重组杆状病毒转移载体pFastBacHTb-VD1-ORF4的鉴定第61-62页
     ·重组穿梭载体Bacmid-VD1-ORF4的PCR鉴定第62页
     ·表达产物的SDS-PAGE及Western blot分析第62-63页
   ·讨论与总结第63-64页
第五章 总结与展望第64-66页
   ·主要工作总结第64页
   ·工作展望第64-66页
参考文献第66-71页
硕士期间发表的论文第71-72页
致谢第72页

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