| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-28页 |
| ·酶 | 第13-15页 |
| ·酶的概念 | 第13-14页 |
| ·酶的来源 | 第14页 |
| ·酶的发现 | 第14-15页 |
| ·丙酮酸脱氢酶复合体的概述 | 第15-18页 |
| ·丙酮酸脱氢酶复合体的分布和组成 | 第15-16页 |
| ·丙酮酸脱氢酶复合体的催化机理 | 第16-17页 |
| ·丙酮酸脱氢酶复合体的调控 | 第17-18页 |
| ·二氢硫辛酰胺脱氢酶的研究进展 | 第18-25页 |
| ·二氢硫辛酰胺脱氢酶的概述 | 第18-19页 |
| ·二氢硫辛酰胺脱氢酶的结构组成 | 第19-20页 |
| ·二氢硫辛酰胺脱氢酶的催化机制 | 第20-22页 |
| ·二氢硫辛酰胺脱氢酶的进化分析 | 第22-23页 |
| ·二氢硫辛酰胺脱氢酶的同功酶 | 第23-24页 |
| ·二氢硫辛酰胺脱氢酶的临床应用意义 | 第24-25页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第25页 |
| ·主要研究内容和技术路线 | 第25-28页 |
| ·主要研究内容 | 第25-27页 |
| ·技术路线 | 第27-28页 |
| 第二章 家蚕DLDH基因的生物信息学分析及克隆鉴定 | 第28-39页 |
| ·材料与试剂 | 第28-30页 |
| ·质粒和菌株 | 第28页 |
| ·试剂 | 第28页 |
| ·试剂的配制 | 第28-29页 |
| ·仪器 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-32页 |
| ·序列来源 | 第30页 |
| ·实验克隆 | 第30-31页 |
| ·生物信息学分析 | 第31-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-38页 |
| ·BmDLDH基因的序列分析 | 第32-33页 |
| ·BmDLDH基因的克隆与鉴定 | 第33-34页 |
| ·BmDLDH的氨基酸序列特征分析 | 第34-36页 |
| ·BmDLDH氨基酸序列的同源性比较 | 第36-37页 |
| ·BmDLDH的进化分析 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38页 |
| ·本章小结 | 第38-39页 |
| 第三章 BmDLDH基因在大肠杆菌中的表达及多克隆抗体的制备 | 第39-51页 |
| ·材料和试剂 | 第39-42页 |
| ·菌株和载体 | 第39-40页 |
| ·试剂 | 第40页 |
| ·试剂的配制 | 第40-42页 |
| ·仪器 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-45页 |
| ·BmDLDH基因表达载体的构建 | 第42页 |
| ·BmDLDH基因在大肠杆菌中的表达 | 第42-43页 |
| ·Western blotting | 第43页 |
| ·质谱分析 | 第43-44页 |
| ·Ni-NTA亲和层析柱分离纯化蛋白质 | 第44-45页 |
| ·多克隆抗体的制备及纯化 | 第45页 |
| ·结果与分析 | 第45-49页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第45-46页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第46-47页 |
| ·质谱鉴定和Western blotting分析 | 第47-49页 |
| ·目的蛋白的纯化回收及多克隆抗体的制备 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 第四章 BmDLDH基因在转录水平及蛋白水平的表达特征分析 | 第51-56页 |
| ·材料和试剂 | 第51页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·试剂 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-53页 |
| ·BmDLDH基因在家蚕各发育阶段和不同组织的转录水平的表达分析 | 第51-52页 |
| ·家蚕五龄幼虫不同组织蛋白的提取 | 第52页 |
| ·BmDLDH基因在家蚕五龄幼虫不同组织蛋白水平的表达分析 | 第52-53页 |
| ·结果与分析 | 第53-54页 |
| ·BmDLDH基因转录水平的表达情况分析 | 第53页 |
| ·BmDLDH基因蛋白水平的表达情况分析 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 第五章 BmDLDH的亚细胞定位 | 第56-61页 |
| ·材料与试剂 | 第56-57页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·试剂 | 第56页 |
| ·试剂配制 | 第56-57页 |
| ·方法 | 第57-58页 |
| ·免疫荧光实验 | 第57页 |
| ·细胞/胞浆/线粒体蛋白质的提取 | 第57-58页 |
| ·Western blotting检测细胞中的BmDLDH蛋白 | 第58页 |
| ·结果与分析 | 第58-60页 |
| ·BmDLDH的免疫荧光分析 | 第58-59页 |
| ·Western blotting分析 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 第六章 家蚕BmDLDH蛋白的可溶性表达和脱氢酶活性测定 | 第61-70页 |
| ·材料与试剂 | 第61-62页 |
| ·材料 | 第61页 |
| ·试剂 | 第61页 |
| ·试剂的配制 | 第61-62页 |
| ·仪器 | 第62页 |
| ·方法 | 第62-65页 |
| ·BmDLDH原核表达条件的优化 | 第62页 |
| ·可溶性BmDLDH融合蛋白表达条件的摸索 | 第62-63页 |
| ·可溶性BmDLDH融合蛋白的分离与纯化 | 第63页 |
| ·BmDLDH酶活性的测定 | 第63-65页 |
| ·结果与分析 | 第65-68页 |
| ·重组BmDLDH融合蛋白表达IPTG诱导浓度诱导的优化 | 第65-66页 |
| ·诱导温度对BmDLDH表达量的影响 | 第66页 |
| ·可溶性BmDLDH融合蛋白表达条件 | 第66页 |
| ·重组BmDLDH蛋白的分离与亲和层析纯化 | 第66-67页 |
| ·重组BmDLDH蛋白的酶活性分析 | 第67-68页 |
| ·讨论 | 第68页 |
| ·小结 | 第68-70页 |
| 第七章 总结和展望 | 第70-72页 |
| ·主要工作总结 | 第70-71页 |
| ·展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-76页 |
| 硕士在读期间发表的学术论文 | 第76页 |
| 登陆的基因 | 第76页 |
| 参加的研究课题 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
