| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-15页 |
| 1 木聚糖的结构和降解酶系的简介 | 第12页 |
| 2 木聚糖酶的概述和应用 | 第12-13页 |
| ·木聚糖酶的概述 | 第12-13页 |
| ·木聚糖酶的应用 | 第13页 |
| 3 甘露聚糖的结构和降解酶系的简介 | 第13页 |
| 4 甘露聚糖酶的概述和应用 | 第13-14页 |
| ·甘露聚糖酶的概述 | 第13页 |
| ·甘露聚糖酶的应用 | 第13-14页 |
| 5. 本研究的目的和意义 | 第14页 |
| 6. 本研究的主要内容 | 第14-15页 |
| 第二章 链霉菌来源木聚糖酶和甘露聚糖酶基因的克隆 | 第15-25页 |
| 1 试验材料和方法 | 第15-16页 |
| ·试验材料 | 第15页 |
| ·菌株和质粒 | 第15页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第15页 |
| ·培养基及常用溶液 | 第15页 |
| ·主要仪器 | 第15页 |
| ·试验方法 | 第15-16页 |
| ·模板DNA的提取 | 第15页 |
| ·木聚糖酶和甘露聚糖酶相关基因部分序列的克隆 | 第15-16页 |
| ·基因部分序列的克隆 | 第15页 |
| ·DNA凝胶片段的转化和重组子的筛选 | 第15-16页 |
| ·TAIL-PCR方法获得侧翼序列 | 第16页 |
| 2 结果与分析 | 第16-24页 |
| ·同源克隆简并引物的设计结果 | 第16页 |
| ·木聚糖酶与甘露聚糖酶基因全序列的获得 | 第16-18页 |
| ·3 个相关基因的序列分析 | 第18-24页 |
| ·巨孢链霉菌DSM41476的木聚糖酶基因xynM4的序列分析 | 第18页 |
| ·巨孢链霉菌DSM41476的木聚糖酶基因xynM6的序列分析 | 第18-19页 |
| ·弗氏链霉菌K11的甘露聚糖酶基因mamS221的序列分析 | 第19-24页 |
| 3 讨论 | 第24页 |
| 4 小结 | 第24-25页 |
| 第三章 巨孢链霉菌DSM41476两个木聚糖酶基因xynM4、xynM6的表达及性质分析 | 第25-38页 |
| 1 试验材料和方法 | 第25-27页 |
| ·试验材料 | 第25页 |
| ·菌株和质粒 | 第25页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第25页 |
| ·仪器 | 第25页 |
| ·培养基及常用溶液 | 第25页 |
| ·试验方法 | 第25-27页 |
| ·真核表达载体pPIC9-xynM4的构建 | 第25页 |
| ·XynM4酶在毕赤酵母中的表达 | 第25-26页 |
| ·重组表达载体的线性化 | 第25页 |
| ·转化、筛选及表达 | 第25-26页 |
| ·真核表达载体pPIC9-xynM6的构建及在毕赤酵母中表达 | 第26页 |
| ·XynM4和XynM6酶的分离纯化及性质测定 | 第26-27页 |
| ·木糖标准曲线的制定 | 第26页 |
| ·XynM4和XynM6酶的分离和纯化 | 第26页 |
| ·酶的蛋白性质分析 | 第26页 |
| ·XynM4和XynM6酶反应最适pH及pH稳定性测定 | 第26页 |
| ·XynM4和XynM6酶反应最适温度及热稳定性测定 | 第26页 |
| ·金属离子及化学试剂对XynM4和XynM6酶活影响的测定 | 第26页 |
| ·XynM4和XynM6酶比活的测定 | 第26页 |
| ·XynM4酶底物特异性的研究 | 第26页 |
| ·XynM4、XynM6酶动力学参数的测定 | 第26页 |
| ·XynM4和XynM6酶降解木聚糖的产物分析 | 第26-27页 |
| ·XynM6酶对麦芽汁滤过率和粘度影响的研究 | 第27页 |
| 2 结果与分析 | 第27-36页 |
| ·木糖标准曲线的绘制 | 第27-28页 |
| ·XynM4和XynM6酶在毕赤酵母菌中的表达和纯化 | 第28-30页 |
| ·pPIC9-xynM4和pPIC9-xynM6表达载体的构建 | 第28页 |
| ·XynM4和XynM6酶在毕赤酵母菌中的表达和纯化 | 第28-30页 |
| ·XynM4和XynM6的酶学性质研究 | 第30-36页 |
| ·pH与温度对XynM4酶反应的影响 | 第30页 |
| ·pH与温度对XynM6酶反应的影响 | 第30-31页 |
| ·金属离子及化学试剂对XynM4酶活的影响 | 第31-32页 |
| ·金属离子及化学试剂对XynM6酶活的影响 | 第32页 |
| ·XynM4酶底物特异性的研究 | 第32-33页 |
| ·XynM4和XynM6酶的动力学参数的测定 | 第33页 |
| ·XynM4和XynM6酶的比活的测定 | 第33页 |
| ·XynM4和XynM6酶降解木聚糖的产物分析 | 第33-35页 |
| ·XynM6酶对麦芽汁滤过率和粘度影响的研究 | 第35-36页 |
| 3 讨论 | 第36-37页 |
| 4 小结 | 第37-38页 |
| 第四章 弗氏链霉菌k11甘露聚糖酶基因manS221的表达及性质分析 | 第38-46页 |
| 1 试验材料和方法 | 第38-39页 |
| ·试验材料 | 第38页 |
| ·菌株和质粒 | 第38页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第38页 |
| ·仪器 | 第38页 |
| ·培养基及常用溶液 | 第38页 |
| ·试验方法 | 第38-39页 |
| ·原核表达载体pET-28a-manS221的构建 | 第38页 |
| ·重组质粒的转化及表达 | 第38页 |
| ·ManS221酶的分离纯化及性质测定 | 第38-39页 |
| ·甘露聚糖标准曲线的制定 | 第38页 |
| ·蛋白含量标准曲线的制定 | 第38页 |
| ·ManS221酶的分离纯化 | 第38-39页 |
| ·ManS221酶反应最适pH及pH稳定性测定 | 第39页 |
| ·ManS221酶反应最适温度及热稳定性测定 | 第39页 |
| ·金属离子及化学试剂对ManS221酶活影响的测定 | 第39页 |
| ·ManS221酶比活的测定 | 第39页 |
| ·ManS221酶动力学参数的测定 | 第39页 |
| ·ManS221酶底物特异性的研究 | 第39页 |
| ·ManS221酶抗蛋白酶能力测定 | 第39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-44页 |
| ·甘露糖标准曲线的绘制 | 第39页 |
| ·甘露糖蛋白含量标准曲线的绘制 | 第39-40页 |
| ·ManS221酶在大肠杆菌中的表达和纯化 | 第40-41页 |
| ·pET-28a-manS221表达载体的构建 | 第40页 |
| ·ManS221酶在毕赤酵母菌中的表达和纯化 | 第40-41页 |
| ·ManS221的酶学性质研究 | 第41-44页 |
| ·pH与温度对ManS221酶反应的影响 | 第41-42页 |
| ·金属离子及化学试剂对ManS221酶活的影响 | 第42-43页 |
| ·ManS221酶动力学参数的测定 | 第43页 |
| ·ManS221酶底物特异性的研究 | 第43页 |
| ·ManS221酶对蛋白酶抗性能力测定 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-45页 |
| 4 小结 | 第45-46页 |
| 本文结论 | 第46页 |
| 创新点 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 作者简介 | 第53页 |
