| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第14-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-29页 |
| 1.1 犬瘟热概述 | 第17页 |
| 1.2 犬瘟热病原学 | 第17-18页 |
| 1.3 犬瘟热流行病学 | 第18-19页 |
| 1.4 犬瘟热的致病机制 | 第19-20页 |
| 1.5 犬瘟热临床诊断学 | 第20-22页 |
| 1.5.1 临床症状 | 第20-21页 |
| 1.5.2 犬瘟热诊断方法 | 第21-22页 |
| 1.5.2.1 CDV的分离培养 | 第21页 |
| 1.5.2.2 分子生物学诊断 | 第21-22页 |
| 1.5.2.3 血清学诊断 | 第22页 |
| 1.5.2.4 病理学诊断 | 第22页 |
| 1.6 CDV受体研究进展 | 第22-24页 |
| 1.6.1 信号淋巴细胞激活分子 | 第23页 |
| 1.6.2 Nectin-4 | 第23-24页 |
| 1.7 犬瘟热的治疗和疫苗研究进展 | 第24-25页 |
| 1.7.1 犬瘟热的治疗 | 第24页 |
| 1.7.2 犬瘟热疫苗研究进展 | 第24-25页 |
| 1.7.2.1 弱毒活疫苗 | 第24-25页 |
| 1.7.2.2 病毒载体疫苗 | 第25页 |
| 1.7.2.3 DNA疫苗 | 第25页 |
| 1.8 CDV的反向遗传学研究进展 | 第25-26页 |
| 1.9 白介素-7研究进展 | 第26-29页 |
| 1.9.1 IL-7与T淋巴细胞 | 第27-28页 |
| 1.9.2 IL-7与B淋巴细胞 | 第28-29页 |
| 第二章 研究的目的和意义 | 第29-30页 |
| 第三章 犬瘟热病毒CDV11株反向遗传操作系统的建立 | 第30-51页 |
| 3.1 实验材料 | 第30-36页 |
| 3.1.1 细胞 | 第30页 |
| 3.1.2 质粒和病毒 | 第30页 |
| 3.1.3 抗体 | 第30页 |
| 3.1.4 主要设备和仪器 | 第30-31页 |
| 3.1.5 主要药品和试剂 | 第31页 |
| 3.1.6 细胞培养相关试剂 | 第31-32页 |
| 3.1.7 细菌培养相关试剂 | 第32页 |
| 3.1.8 凝胶电泳、Western blotting缓冲液及相关试剂 | 第32-33页 |
| 3.1.9 ELISA相关试剂 | 第33页 |
| 3.1.10 引物设计与合成 | 第33-36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-45页 |
| 3.2.1 CDV11株基因组测序 | 第36-40页 |
| 3.2.1.1 病毒培养与收获 | 第36页 |
| 3.2.1.2 病毒基因组总RNA的提取 | 第36页 |
| 3.2.1.3 病毒基因组总RNA反转录 | 第36-37页 |
| 3.2.1.4 目的基因扩增 | 第37-38页 |
| 3.2.1.5 PCR产物的回收 | 第38页 |
| 3.2.1.6 大肠杆菌感受态的制备 | 第38页 |
| 3.2.1.7 目的片段的连接 | 第38-39页 |
| 3.2.1.8 连接产物转化 | 第39页 |
| 3.2.1.9 重组质粒的小量提取 | 第39页 |
| 3.2.1.10 重组质粒的鉴定 | 第39-40页 |
| 3.2.2 CDV11株感染性克隆及其辅助质粒的构建 | 第40-41页 |
| 3.2.2.1 CDV11株感染性克隆的构建 | 第40页 |
| 3.2.2.2 辅助质粒的构建 | 第40页 |
| 3.2.2.3 去内毒素提取质粒 | 第40-41页 |
| 3.2.3 病毒拯救 | 第41-42页 |
| 3.2.3.1 细胞的复苏、培养及传代 | 第41-42页 |
| 3.2.3.2 犬瘟热病毒rCDV11的拯救 | 第42页 |
| 3.2.4 间接免疫荧光检测获救病毒 | 第42-43页 |
| 3.2.5 Westernblotting检测获救病毒 | 第43页 |
| 3.2.6 犬瘟热病毒rCDV11的制备及滴定 | 第43-44页 |
| 3.2.7 犬瘟热病毒rCDV11生长动力学曲线测定 | 第44-45页 |
| 3.3 实验结果 | 第45-50页 |
| 3.3.1 CDV11株感染性克隆及其辅助质粒的构建 | 第45-46页 |
| 3.3.2 病毒的拯救 | 第46-47页 |
| 3.3.3 间接免疫荧光检测获救病毒 | 第47页 |
| 3.3.4 Western blotting检测获救病毒 | 第47-48页 |
| 3.3.5 获救犬瘟热病毒rCDV11的生长动力学曲线 | 第48-50页 |
| 3.4 讨论 | 第50-51页 |
| 第四章 犬瘟热病毒载体外源基因插入位点的筛选 | 第51-60页 |
| 4.1 实验材料 | 第51-53页 |
| 4.1.1 病毒株和质粒 | 第51页 |
| 4.1.2 主要试剂和仪器 | 第51页 |
| 4.1.3 引物设计与合成 | 第51-53页 |
| 4.2 实验方法 | 第53-56页 |
| 4.2.1 各重组犬瘟热病毒rCDV-GFP感染性克隆的构建 | 第53页 |
| 4.2.2 各重组犬瘟热病毒rCDV-GFP的拯救 | 第53页 |
| 4.2.3 各重组犬瘟热病毒rCDV-GFP的遗传稳定性检测 | 第53-54页 |
| 4.2.4 各重组犬瘟热病毒rCDV-GFP的生长动力学曲线 | 第54页 |
| 4.2.5 各重组犬瘟热病毒rCDV-GFP的荧光检测 | 第54页 |
| 4.2.6 Western blotting检测各重组犬瘟热病毒GFP的表达量 | 第54-56页 |
| 4.3 实验结果 | 第56-59页 |
| 4.3.1 各重组犬瘟热病毒rCDV-GFP感染性克隆的构建 | 第56页 |
| 4.3.2 各重组犬瘟热病毒rCDV-GFP的拯救 | 第56页 |
| 4.3.3 各重组犬瘟热病毒rCDV-GFP的生长动力学曲线 | 第56-57页 |
| 4.3.4 各重组犬瘟热病毒rCDV-GFP的荧光检测 | 第57-58页 |
| 4.3.5 各重组犬瘟热病毒GFP表达量的检测 | 第58-59页 |
| 4.4 讨论 | 第59-60页 |
| 第五章 表达IL-7的重组犬瘟热病毒的构建及其免疫原性的研究 | 第60-76页 |
| 5.1 实验材料 | 第60-61页 |
| 5.1.1 主要试剂和仪器 | 第60页 |
| 5.1.2 实验动物 | 第60页 |
| 5.1.3 引物设计与合成 | 第60-61页 |
| 5.2 实验方法 | 第61-65页 |
| 5.2.1 重组犬瘟热病毒rCDV-IL7感染性克隆的构建 | 第61页 |
| 5.2.2 重组犬瘟热病毒rCDV-IL7的拯救 | 第61页 |
| 5.2.3 重组犬瘟热病毒rCDV-IL7的鉴定 | 第61-62页 |
| 5.2.3.1 免疫荧光鉴定获救病毒 | 第61页 |
| 5.2.3.2 ELISA检测IL-7的表达 | 第61-62页 |
| 5.2.4 重组犬瘟热病毒rCDV-IL7的扩增及制备 | 第62页 |
| 5.2.5 重组犬瘟热病毒rCDV-IL7的遗传稳定性检测 | 第62-63页 |
| 5.2.6 重组犬瘟热病毒rCDV-IL7的细胞活性检测 | 第63页 |
| 5.2.7 重组犬瘟热病毒rCDV-IL7的多步生长曲线 | 第63页 |
| 5.2.8 重组犬瘟热病毒rCDV-IL7的致病性实验 | 第63-64页 |
| 5.2.9 重组犬瘟热病毒rCDV-IL7的免疫原性实验 | 第64页 |
| 5.2.10 犬瘟热病毒血清中和实验 | 第64-65页 |
| 5.3 实验结果 | 第65-74页 |
| 5.3.1 鼠源IL-7基因的获取 | 第65-66页 |
| 5.3.2 重组犬瘟热病毒rCDV-IL7感染性克隆的构建 | 第66-67页 |
| 5.3.3 重组犬瘟热病毒rCDV-IL7的鉴定 | 第67-69页 |
| 5.3.3.1 免疫荧光鉴定获救病毒 | 第67-68页 |
| 5.3.3.2 ELISA检测IL-7的表达 | 第68-69页 |
| 5.3.4 重组犬瘟热病毒rCDV-IL7的遗传稳定性检测 | 第69页 |
| 5.3.5 重组犬瘟热病毒rCDV-IL7对细胞活性的影响 | 第69-70页 |
| 5.3.6 重组犬瘟热病毒rCDV-IL7的多步生长曲线 | 第70-71页 |
| 5.3.7 重组犬瘟热病毒rCDV-IL7对小鼠的致病性实验 | 第71-72页 |
| 5.3.8 重组犬瘟热病毒rCDV-IL7对小鼠的免疫原性实验 | 第72-74页 |
| 5.4 讨论 | 第74-76页 |
| 第六章 全文结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
